一种提取木瓜凝乳蛋白酶的方法

摘要

本发明公开了一种提取木瓜凝乳蛋白酶的方法，涉及酶制剂领域。本发明所提供的方法，包括如下步骤：1)制备番木瓜幼果浆或番木瓜幼果浆干燥物的磷酸盐缓冲液溶液；2)加入壳聚糖溶液，沉淀后取上清液；3)加入硫酸铵，至溶液中硫酸铵的饱和度为30-40％，保留上清液；4)加入硫酸铵，至溶液中硫酸铵的饱和度为40-50％，保留上清液；5)加入过量的酒石酸使溶液的pH＜2.5，絮凝沉淀后，保留上清液；6)加入硫酸铵，至溶液中硫酸铵的饱和度为65-70％，收集沉淀物；7)超滤，收集浓缩液；8)加入等量磷酸钠缓冲液，混均；9)用阳离子纤维素CM-C92层析柱分离木瓜凝乳蛋白酶；10)以截留分子量为1万的聚砜中空纤维超滤膜浓缩木瓜凝乳蛋白酶洗脱液，得到木瓜凝乳蛋白酶浓缩液。

主权项

1、一种提取木瓜凝乳蛋白酶的方法，包括如下步骤：1)将1公斤番木瓜幼果浆或番木瓜幼果浆干燥物溶解于磷酸盐缓冲液；2)向番木瓜幼果果浆的磷酸盐缓冲液中加入壳聚糖溶液，沉淀后去除沉淀物，保留上清液，所述加入的壳聚糖的终浓度为0.05-0.1％；3)向步骤2)中的上清液中加入硫酸铵，至溶液中硫酸铵的饱和度为30-40％，去除沉淀，保留上清液；4)向步骤3)中得到的上清液中加入硫酸铵，至溶液中硫酸铵的饱和度为40-50％，去除沉淀，保留上清液；5)向步骤4)中得到的上清液中加入过量的酒石酸使溶液的pH＜2.5，絮凝沉淀后，去除沉淀物，保留上清液；6)向步骤5)中得到的上清液中加入硫酸铵，至溶液中硫酸铵的饱和度为65-70％，收集沉淀物；7)用纯水溶解沉淀物，以截留分子量为2万道尔顿的聚砜中空纤维超滤膜浓缩溶液，分次加入2-8℃纯水、在0.1兆帕条件下循环超滤，收集浓缩液；8)向浓缩液中加入等量pH5.5的0.2mol/L磷酸钠缓冲液，混均；9)用阳离子纤维素CM-C92层析柱分离步骤8)所得溶液中的木瓜凝乳蛋白酶，收集pH5.5的0.7mol/L磷酸钠缓冲液洗脱液；10)以截留分子量为1万的聚砜中空纤维超滤膜浓缩木瓜凝乳蛋白酶洗脱液，得到木瓜凝乳蛋白酶浓缩液。