骨保护素融合蛋白的制备方法和用途

摘要

本发明涉及一种OPG融合蛋白的生产方法和用途，它为R1-L-R2形式，其中R1为OPG蛋白、其变体或片段，R2为Fc蛋白、其变体或片段；L为接头。本发明获得的融合蛋白可用于治疗骨质疏松和肿瘤相关骨损失等。

主权项

1.一种产生OPG融合蛋白的方法，其特征在于，该方法包括：(a)将编码OPG、其变体或片段的核苷酸序列和编码Fc蛋白、其变体或片段的核苷酸序列可操作地连于表达载体，得到OPG融合蛋白重组表达载体；(b)将步骤(a)中的重组表达载体转入甲醇酵母，筛选获得表达OPG融合蛋白的工程菌；(c)在合适的条件下发酵培养步骤(b)获得的工程菌；(d)从步骤(c)中的发酵培养产物中纯化分离所述融合蛋白；其中，所述融合蛋白的形式为R1-L-R2和R1-R2，其中R1为OPG蛋白、或其变体或片段，R2为Fc蛋白、或其变体或片段，L为接头；其中，所述OPG蛋白、或其变体、片段选自：(1)SEQ ID NO：1所示的OPG蛋白序列；(2)氨基酸序列22-X，其中X为SEQ ID NO：1所示的包括位置185-401的任何残基；(3)在(2)所述的氨基酸序列前加上Ile-Asp两个氨基酸；(4)在(2)所述的氨基酸序列前加上Met；所述Fc蛋白、或其变体或片段选自：(A)SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；(B)亚部分(A)的氨基酸序列，在以下一个或多个位置具有取代或缺失的不同氨基酸，其中的编号采用SEQ ID NO：2的序列编号：i.一个或多个半胱氨酸残基；ii.一个或多个酪氨酸残基；iii.缺失或用丙氨酸取代位置5的半胱氨酸；iv.缺失或用谷氨酰胺取代位置20的谷氨酸；v.缺失或用丙氨酸取代位置130的谷氨酸；vi.缺失或用丙氨酸取代位置105的赖氨酸；vii.缺失或取代位置107的赖氨酸；viii.缺失N端1-17位的氨基酸序列；ix.取代或缺失一个或多个残基以消除Fc受体结合位点；x.取代或缺失一个或多个残基以消除补体(Clq)结合位点；xi.亚部分i-x的组合。