发明名称 木瓜扭曲叶片镶嵌病毒之全长基因组
摘要 本发明目的是决定木瓜扭曲叶片镶嵌病毒全长基因组 RNA之核酸序列。本发明提供一种木瓜扭曲叶片镶嵌病毒之全长基因组RNA,一种利用全长基因组RNA诊断木瓜扭曲叶片镶嵌病毒感染之方法,一种产生木瓜扭曲叶片镶嵌病毒抗性植物之方法,及在一种植物体内产生外来蛋白质之方法。
申请公布号 TWI257952 申请公布日期 2006.07.11
申请号 TW091102405 申请日期 2002.02.08
申请人 独立行政法人国际农林水产业研究中心 发明人 真冈 哲夫;田谷 达儿
分类号 C12N15/09;A01H1/00;C12N5/10;C12N9/50;C12P21/02;C12Q1/68 主分类号 C12N15/09
代理机构 代理人 陈长文 台北市松山区敦化北路201号7楼
主权项 1.一种RNA,其系由SEQ ID NO:1之核酸序列或互补于 该核酸序列之核酸序列所组成。 2.一种DNA,其系由SEQ ID NO:1之核酸序列(其中尿嘧 啶为胸腺嘧啶所取代)或互补于该核酸序列之核 酸序列所组成。 3.一种诊断植物中为木瓜扭曲叶镶嵌病毒感染之 方法,其系包括藉由侦测植物中之病毒特异性RNA片 段,以决定植物是否为病毒所感染,其中RNA片段系 选自于下列(1)-(5): (1)相当于与SEQ ID NO:1所示核酸序列相同之核 酸序列的RNA片段; (2)相当于与SEQ ID NO:1所示核酸序列互补之核 酸序列的RNA片段; (3)系(1)或(2)之RNA片段的一部份,且具有足以充作诊 断PLDMV感染之指标物之种-特异性的RNA片段; (4)系(1)之RNA片段的一部份,且编码P1蛋白之RNA片段; (5)系(1)或(2)之RNA片段中具有一个以上核酸之删 除、取代或附加,且具有足以充作诊断PLDMV感染之 指标物之种-特异性的RNA片段。 4.如申请专利范围第3项之方法,其中RNA片段系选自 于下列(1)-(5): (1)相当于与SEQ ID NO:1所示第136-1575核酸序列相同 之核酸序列的RNA片段; (2)相当于与SEQ ID NO:1所示第136-1575酸序列互补之 核酸序列的RNA片段; (3)系(1)或(2)之RNA片段的一部份,且具有足以充作诊 断PLDMV感染之指标物之种-特异性的RNA片段; (4)系(1)之RNA片段中具有一个以上核酸之删除、 取代或附加,且编码P1蛋白; (5)系(2)之RNA片段中具有一个以上核酸之删除、 取代或附加,且具有足以充作诊断PLDMV感染之指标 物之种-特异性的RNA片段。 5.如申请专利范围第3项之方法,其中RNA片段系选自 于下列(1)-(3): (1)相当于与SEQ ID NO:1所示第1-150核酸或第136-1575 核酸序列中之核酸1200-1440相同或互补之核 酸序列的RNA片段; (2)包含(1)且具有足以充作诊断PLDMV感染之指标物 之种-特异性的RNA片段; (3)系(1)之RNA片段中具有一个以上核酸之删除、 取代或附加,且具有足以充作诊断PLDMV感染之指标 物之种-特异性。 6.一种制造对木瓜扭曲叶片镶嵌病毒具抗性之植 物的方法,其系包括将具有可给予对木爪扭曲叶片 镶嵌病毒具抗性之功能的DNA片段导入至植物,其中 该DNA片段系相当于SEQ ID NO:1所示核酸序列之一 部份,且编码衣壳蛋白质(CP)、HC-Pro或NIb。 7.如申请专利范围第6项之方法,其中该DNA片段系选 自于下列(1)-(4): (1)相当于与SEQ ID NO:1所示第9064-9945、第1576-2949或 第7501-9063核酸之DNA片段,其中尿嘧啶为胸腺嘧啶 所取代; (2)包含(1)之DNA片段且分别编码衣壳蛋白质(CP)、HC- Pro或Nib之DNA片段; (3)系(1)中具有一个以上核酸之删除、取代或附 加,且分别编码衣壳蛋白质(CP)、HC-Pro或Nib之DNA片 段; (4)相当于(1)之一部份之DNA片段,且具有可给予植物 对木瓜扭曲叶片镶嵌病毒具抗性之功能的DNA片段 。 8.如申请专利范围第6项之方法,其中该DNA片段系选 自于下列(1)-(5): (1)相当于与SEQ ID NO:1所示第1-380核酸或第9064-9945 核酸序列中之核酸780-882的DNA片段,其中尿嘧 啶为胸线嘧啶所取代; (2)相当于与SEQ ID NO:1所示第27-140核酸或第1576- 2949核酸序列中之核酸1280-1374的DNA片段,其中 尿嘧啶为胸腺嘧啶所取代; (3)相当于与SEQ ID NO:1所示第1-81核酸或第7501-9063 核酸序列中之核酸1447-1563的DNA片段,其中尿嘧 啶为胸腺嘧啶所取代; (4)系(1)-(3)之任一DNA片段中具有一个以上核酸之 删除、取代或附加,具有可给予植物对PLDMV具抗性 之功能; (5)包含(1)-(3)之任一DNA片段且具有可给予植物对 PLDMV具抗性之功能的DNA片段。 9.一种在植物中制造外来蛋白质之方法,其系包括 以下步骤: 1)自SEQ ID NO:1之木爪扭曲叶片镶嵌病毒之基因组RNA 合成cDNA; 2)将编码可以衍生自木瓜扭曲叶片镶嵌病毒之蛋 白切断之胺基酸序列的核酸序列,附加至编码 该外来蛋白质之基因之5'末端及3'末端,以得具核 酸序列及基因之核酸序列之DNA片段; 3)将2)之DNA片段嵌入1)之cDNA内; 4)将RNA聚合作用在3)之cDNA上以制备RNA;及 5)以4)之RNA感染植物。 10.一种选自由下列(a)至(c)所组成之群之蛋白质: (a)含有SEQ ID NO:4之胺基酸序列之蛋白质; (b)含有SEQ ID NO:4之胺基酸序列中具有一个以上胺 基酸之缺失、置换或附加,并有可切断Gln-Ala、Gln- Ser及Glu-Gly间之键之蛋白活性的蛋白质;及 (c)衍生自由一种DNA所编码之木瓜扭曲叶片镶嵌病 毒且具有可切断Gln-Ala,Gln-Ser及Glu-Gly间之键之蛋 白活性的蛋白质,该DNA系在严苛条件下可与含有 SEQ ID NO:3之核酸序列之DNA或与该核酸序列互 补之DNA杂交。 11.一种编码申请专利范围第10项之蛋白质之cDNA。 图式简单说明: 图1a,b示出搜寻P1蛋白质-编码区之BLASTN同质性之结 果,其相当于SEQ ID NO:1所示核酸136-1675之序列部 份。 图2a,b示出搜寻衣壳蛋白质(CP)编码区之BLASTN同质 性之结果(核酸9064-9945,如SEQ ID NO:1所示)。 图3a,b示出搜寻HC-Pro编码区之BLASTN同质性之结果( 核酸1576-2949)。 图4a,b示出搜寻NIb编码区之BLASTN同质性之结果(核 酸7501-9063)。
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