发明名称 电流亲和试验以及经电刺激的核酸复合物
摘要 一种决定第一条含核酸硷基序列与第二条含核酸硷基序列之亲合力的方法,此方法包含提供一个含有第一条含核酸硷基序列与第二条含核酸硷基序列的测试培养基,其中,第一条含核酸硷基序列与第二条含核酸硷基序列的长度不同,供应电压通过此测试培养基,测量通过此测试培养基的测试电流,以及藉由评估此测试电流是否等于一个由含有一较长的第一条含核酸硷基序列与第二条含核酸硷基序列的参考培养基所测得的参考电流,来决定亲合力,一种在电刺激状态下,培养基中至少含有两条含核酸硷基序列的复合物,其中,培养基的电传导性,在培养基温度接近及超过此复合物的Tm值时,不会有高原期出现,并以线性型态上升。
申请公布号 TWI257427 申请公布日期 2006.07.01
申请号 TW091133692 申请日期 2002.11.19
申请人 隆恩朴研究公司 发明人 葛伦H. 艾瑞克森
分类号 C12Q1/68 主分类号 C12Q1/68
代理机构 代理人 林镒珠 台北市中山区长安东路2段112号9楼
主权项 1.一种决定第一条含核酸硷基序列与第二条含核 酸硷基序列之亲合力的方法,此方法包含: 提供一个含有第一条含核酸硷基序列与第二条含 核酸硷基序列的测试培养基,其中,第一条含核酸 硷基序列与第二条含核酸硷基序列的长度不同; 供应电压通过此测试培养基; 测量通过此测试培养基的测试电流;以及 藉由评估此测试电流是否等于一个由含有一较长 的第一条含核酸硷基序列与第二条含核酸硷基序 列的参考培养基所测得的参考电流,来决定亲合力 。 2.根据申请专利范围第1项之方法,其中第一条含核 酸硷基序列与第二条含核酸硷基序列皆为单股,且 当测试电流超过参考电流时,此第一条含核酸硷基 序列对于第二条含核酸硷基序列无亲合力。 3.根据申请专利范围第1项之方法,其中第一条含核 酸硷基序列与第二条含核酸硷基序列皆为单股,且 当测试电流与参考电流相等时,此第一条含核酸硷 基序列对于第二条含核酸硷基序列有亲合力。 4.根据申请专利范围第3项之方法,其中亲合力为平 行同源的结合力、反向平行同源的结合力、平行 互补的结合力、反向平行互补的结合力。 5.根据申请专利范围第3项之方法,其中亲合力为非 键结关系之结合力。 6.根据申请专利范围第1项之方法,其中第一条含核 酸硷基序列与第二条含核酸硷基序列皆为双股,且 当测试电流与参考电流相等时,此第一条含核酸硷 基序列对于第二条含核酸硷基序列无亲合力。 7.根据申请专利范围第1项之方法,其中第一条含核 酸硷基序列与第二条含核酸硷基序列皆为双股,且 当测试电流超过参考电流时,此第一条含核酸硷基 序列对于第二条含核酸硷基序列有亲合力。 8.根据申请专利范围第7项之方法,其中亲合力为平 行同源的结合力、反向平行同源的结合力、平行 互补的结合力或反向平行互补的结合力。 9.根据申请专利范围第7项之方法,其中亲合力为非 键结关系之结合力。 图式简单说明: 图1A,1B,2A,2B,3A,3B,3C,3D,4A,4B,4C与4D,是电流对温度的 函数作图; 图1A系比较随着温度增加,在经由9伏特之电压刺激 下,二次水及15-mer之单股去氧核醣核酸(8微微莫耳/ 500微升)之IPA値; 图1B系比较随着温度增加,在经由9伏特之电压刺激 下,二次水及15-mer之单股去氧核醣核酸(8微微莫耳/ 500微升)之AA値; 图2A系比较随着温度降低,在经由9伏特之电压刺激 下,二次水及15-mer之单股去氧核醣核酸(8微微莫耳/ 500微升)之IPA値; 图2B系比较随着温度降低,在经由9伏特之电压刺激 下,二次水及15-mer之单股去氧核醣核酸(8微微莫耳/ 500微升)之AA値; 图3A系随着温度增加,在经由9伏特之电压刺激下, 二次水及15-mer之双股去氧核醣核酸(8微微莫耳/500 微升)之IPA値; 图3B系随着温度增加,在经由9伏特之电压刺激下, 二次水及15-mer之双股去氧核醣核酸(8微微莫耳1500 微升)之AA値; 图3C系随着温度增加:在经由9伏特之电压刺激下,15 -mer之单股去氧核醣核酸与其反向互补之15-mer之单 股去氧核醣核酸(各4微微莫耳/500微升)混合后之IPA 値; 图3D系随着温度增加,在经由9伏特之电压刺激下,15 -mer之单股去氧核醣核酸与其反向互补之15-mer之单 股去氧核醣核酸(各4微微莫耳/500微升)混合后之AA 値; 图4A系随着温度下降,在经由9伏特之电压刺激下,15 -mer之双股去氧核醣核酸(8微微莫耳/500微升)之IPA 値; 图4B系随着温度下降,在经由9伏特之电压刺激下,15 -mer之双股去氧核醣核酸(8微微莫耳/500微升)之AA値 ; 图4C系随着温度下降,在经由9伏特之电压刺激下,15 -mer之单股去氧核醣核酸与其反向互补之15-mer之单 股去氧核醣核酸(各4微微莫耳/500微升)混合后之IPA 値; 图4D系随着温度下降,在经由9伏特之电压刺激下,15 -mer之单股去氧核醣核酸与其反向互补之15-mer之单 股去氧核醣核酸(各4微微莫耳/500微升)混合后之AA 値; 图5A,5B,6A,6B,7A,7B,8A与8B,电流对温度及DNA浓度的函 数作图; 图5A系比较随着温度增加,不同浓度之15-mer之单股 去氧核醣核酸(微微莫耳/500微升)之IPA値; 图5B系比较随着温度增加,不同浓度之15-mer之单股 去氧核醣核酸(微微莫耳/500微升)之AA値; 图6A系比较随着温度下降,不同浓度之15-mer之单股 去氧核醣核酸(微微莫耳/500微升)之IPA値; 图6B系比较随着温度下降,不同浓度之15-mer之单股 去氧核醣核酸(微微莫耳/500微升)之AA値; 图7A系比较随着温度增加,不同浓度之15-mer之双股 去氧核醣核酸(微微莫耳/500微升)之IPA値; 图7B系比较随着温度增加,不同浓度之15-mer之双股 去氧核醣核酸(微微莫耳/500微升)之AA値; 图8A系比较随着温度下降,不同浓度之15-mer之双股 去氧核醣核酸(微微莫耳/500微升)之IPA値; 图8B系比较随着温度下降,不同浓度之15-mer之双股 去氧核醣核酸(微微莫耳1500微升)之AA値; 图9A与9B,是电流对去氧核醣核酸浓度的函数作图; 图9A系于70℃时,15-mer ssDNA之IPA値对ssDNA浓度的函数 作图; 图9B系于70℃时,15-mer ssDNA之AA値对ssDNA浓度的函数 作图; 图10A,10B,11A,11B,12A,12B,13A,13B,14A,14B,15A与15B,是电流 对温度及电压的函数作图; 图10A系随着温度增加,在不同的电压刺激下,二次 水之IPA値; 图10B系随着温度增加,在不同的电压刺激下,二次 水之AA値; 图11A系随着温度下降,在不同的电压刺激下,二次 水之IPA値; 图11B系随着温度下降,在不同的电压刺激下,二次 水之AA値; 图12A系随着温度增加,在不同的电压刺激下,15-mer ssDNA之IPA値; 图12B系随着温度增加,在不同的电压刺激下,15-mer ssDNA之AA値; 图13A系随着温度下降,在不同的电压刺激下,15-mer ssDNA之IPA値; 图13B系随着温度下降,在不同的电压刺激下,15-mer ssDNA之AA値; 图14A系随着温度增加,在不同的电压刺激下,15-mer dsDNA之IPA値; 图14B系随着温度增加,在不同的电压刺激下,15-mer dsDNA之AA値; 图15A系随着温度下降,在不同的电压刺激下,15-mer dsDNA之IPA値; 图15B系随着温度下降,在不同的电压刺激下,15-mer dsDNA之AA値; 图16A,16B,17A,17B,18A,18B,19A,19B,20A,20B,21A,21B,22A,22B,23A, 23B,24A,24B,25A,25B,26A,26B,27A与27B,是电流对温度及去 氧核醣核酸亲合力的函数作图; 图16A系在温度增加时,比较15-mer及50-mer ssDNA和15-mer 及50-mer dsDNA之IPA値; 图16B系在温度增加时,比较15-mer及50-mer ssDNA和15-mer 及50-mer dsDNA之AA値; 图17A系在温度下降时,比较15-mer及50-mer ssDNA和15-mer 及50-mer dsDNA之IPA値; 图17B系在温度下降时,比较15-mer及50-mer ssDNA和15-mer 及50-mer dsDNA之AA値; 图18A系在温度增加时,比较15-mer ssDNA及平行同源50- mer ssDNA之IPA値; 图18B系在温度增加时,比较15-mer ssDNA及平行同源50- mer ssDNA之AA値; 图19A系在温度下降时,比较15-mer ssDNA及平行同源50- mer ssDNA之IPA値; 图19B系在温度下降时,比较15-mer ssDNA及平行同源50- mer ssDNA之AA値; 图20A系在温度增加时,比较15-mer ssDNA及反向平行互 补50-mer ssDNA之IPA値; 图20B系在温度增加时,比较15-mer ssDNA及反向平行互 补50-mer ssDNA之AA値; 图21A系在温度下降时,比较15-mer ssDNA及反向平行互 补50-mer ssDNA之IPA値; 图21B系在温度下降时,比较15-mer ssDNA及反向平行互 补50-mer ssDNA之AA値; 图22A系在温度增加时,比较15-mer ssDNA及没有相关性 之50-mer ssDNA之IPA値; 图22B系在温度增加时,比较15-mer ssDNA及没有相关性 之50-mer ssDNA之AA値; 图23A系在温度下降时,比较15-mer ssDNA及没有相关性 之50-mer ssDNA之IPA値; 图23B系在温度下降时,比较15-mer ssDNA及没有相关性 之50-mer ssDNA之AA値; 图24A系在温度增加时,比较50-mer之双股去氧核糖核 酸与其反向平行互补15-mer之单股去氧核糖核酸的 混合,或与平行同源之15-mer之双股去氧核糖核酸的 混合之IPA値; 图24B系在温度增加时,比较50-mer之双股去氧核糖核 酸与其反向平行互补15-mer之单股去氧核糖核酸的 混合,或与平行同源之15-mer之双股去氧核糖核酸的 混合之AA値; 图25A系在温度下降时,比较50-mer之双股去氧核糖核 酸与其反向平行互补15-mer之单股去氧核糖核酸的 混合,或与平行同源之15-mer之双股去氧核糖核酸的 混合之IPA値; 图25B系在温度下降时,比较50-mer之双股去氧核糖核 酸与其反向平行互补15-mer之单股去氧核糖核酸的 混合,或与平行同源之15-mer之双股去氧核糖核酸的 混合之AA値; 图26A系在温度增加时,比较50-mer之双股去氧核糖核 酸与不相关之15-mer之单股去氧核糖核酸的混合,或 与不相关之15-mer之双股去氧核糖核酸的混合之IPA 値; 图26B系在温度增加时,比较50-mer之双股去氧核糖核 酸与不相关之15-mer之单股去氧核糖核酸的混合,或 与不相关之15-mer之双股去氧核糖核酸的混合之AA 値; 图27A系在温度下降时,比较50-mer之双股去氧核糖核 酸与不相关之15-mer之单股去氧核糖核酸的混合,或 与不相关之15-mer之双股去氧核糖核酸的混合之IPA 値; 图27B系在温度下降时,比较50-mer之双股去氧核糖核 酸与不相关之15-mer之单股去氧核糖核酸的混合,或 与不相关之15-mer之双股去氧核糖核酸的混合之AA 値;以及 图28A,28B,29A,29B,30A,30B,31A与31B,是在搅拌状况下,电 流对温度及去氧核醣核酸浓度的函数作图; 图28A系比较随着温度增加并且搅拌下,不同浓度之 15-mer之单股去氧核醣核酸之IPA値; 图28B系比较随着温度增加并且搅拌下,不同浓度之 15-mer之单股去氧核醣核酸之AA値; 图29A系比较随着温度下降并且搅拌下,不同浓度之 15-mer之单股去氧核醣核酸之IPA値; 图29B系比较随着温度下降并且搅拌下,不同浓度之 15-mer之单股去氧核醣核酸之AA値; 图30A系比较随着温度增加并且搅拌下,不同浓度之 15-mer之双股去氧核醣核酸之IPA値; 图30B系比较随着温度增加并且搅拌下,不同浓度之 15-mer之双股去氧核醣核酸之AA値; 图31A系比较随着温度下降并且搅拌下,不同浓度之 15-mer之双股去氧核醣核酸之IPA値; 图31B系比较随着温度下降并且搅拌下,不同浓度之 15-mer之双股去氧核醣核酸之AA値。
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