核心蛋白聚糖的制备方法

摘要

核心蛋白聚糖的制备方法，以动物肌肉组织为原料，采用匀浆、离心、收沉淀、透析、研磨及层析及回收，再鉴定质量和纯度，活性检测。该发明具有操作简便易行，且生产出的药物纯度高、活性高等特点。

主权项

1、核心蛋白聚糖的制备方法，包括均浆、离心、沉淀、透析、研磨、层析、收峰、定量定性、冻干保存步骤；匀浆液由10mmol/L三羟基氨基甲烷.盐酸、0.5％曲拉通Trion X-100、10mmmol/L PH8.0乙二胺四乙酸二钠、50mmol/LPH6.0醋酸钠缓冲溶液配制而成；沉淀溶解液由4mmol/L尿素、10mmol/L三羟甲基氨基甲烷.盐酸、10mmmol/L乙二胺四乙酸二钠、50mmol/L醋酸钠缓冲溶液配制而成；其特征在于：各制备步骤的过程或技术参数为：①、匀浆步骤中所采用的匀浆液与所取新鲜动物肌肉组织的体积比为1～3∶1；②、离心步骤中的技术参数为：离心速度：8000～12000转/分钟；温度条件：2～10℃；离心时间：10～30分钟；③、沉淀步骤的过程为：用所得离心悬浮沉淀物1～3倍体积的沉淀溶解液溶解离心悬浮沉淀物，然后在2～10℃条件下，用电磁搅拌器连续搅拌过夜；④、透析步骤的过程为：将搅拌所得物移入玻璃纸透析袋，在2～10℃温度条件下先用流水透析48小时，再用10倍体积的蒸馏水透析24小时，最后用10倍体积的磷酸盐缓冲溶液(PBS)再透析48小时；所述的磷酸盐缓冲溶液浓度为1～10mmol/L，PH值为6～7；⑤、研磨步骤中用浓度为1～10mmol/L、PH值为6～7的磷酸盐缓冲溶液PBS或0.9％氯化钠多次反复研磨；⑥、离心收上清液步骤：过阴离子交换柱，洗脱液浓度为1～10mmol/L、PH值6～7磷酸盐缓冲液PBS或A、B液；A液：10mmol/L三羟基氨基甲烷盐酸和PH值为8.0、1mmol/L的乙二胺四乙酸二钠；B液：A液+1mmol/L氯化钠；在280nm监测下收取目标蛋白洗脱峰，测定含量、纯度及生物活性。