| 主权项 |
1.一种基于醛基的微粒表面多重生物功能因子组装方法，其特征在于包括以下步骤：1)双亲性多糖衍生物的制备(1)醛化多糖的制备：4℃避光条件下，在水体系中按高碘酸钠与糖单元的摩尔比为1∶2～50投料反应0.5～8h，将反应液用截留分子量10,00～40,000半透膜对去离子透析10～144h，冷冻干燥得固态产物；所述的多糖选自相对分子质量10,000～1000,000的葡聚糖或淀粉或普鲁兰；(2)双亲性改性醛化多糖的制备：a.胆固醇改性醛化多糖的制备：将胆固醇与丁二酸酐按摩尔比1∶1～5投料，70℃在吡啶催化下反应3～8h生成胆固醇-3-半琥珀酸，乙醇重结晶1～3次，真空干燥；将胆固醇-3-半琥珀酸与二氯亚砜按摩尔比1∶2～10溶于10～50mL干燥三氯甲烷中，70℃反应1～10h，生成胆固醇-3-半琥珀酸酰氯，真空蒸出液体，将残余固体复溶于20mL干燥三氯甲烷中待用；将上述冻干得到的醛化多糖溶于40mL干燥的二甲基亚砜中，滴加数滴三乙胺，按酰氯与糖单元的摩尔比为1∶2～50量取胆固醇-3-半琥珀酸酰氯滴加入醛化多糖溶液中，氮气保护，80℃反应3～8h，产物对去离子水透析10～144h，透析液冷冻干燥，得胆固醇改性醛化多糖；b.胆酸改性醛化多糖的制备：将1g胆酸溶于20～60mL乙醇中，40～78℃在1～5mL浓盐酸催化下形成胆酸乙酯，将胆酸乙酯的乙醇溶液在40～78℃下向溶有0.5～10mL水合肼的乙醇溶液中缓慢滴加，反应3～8h，冷却析出物用乙醇重结晶，得胆酸酰肼；将100mg醛化多糖溶于8mL水中，胆酸酰肼溶于16mL的N，N-二甲基甲酰胺中，两溶液混合得到一均相体系，体系中胆酸酰肼与糖单元的摩尔比为1∶2～50；体系的pH值调节到4，室温反应1～24h，反应溶液倒入大量的甲醇中沉淀出产物，过滤，用甲醇充分洗涤多次，室温下真空干燥，得胆酸改性醛化多糖；c.苯氧基改性醛化多糖的制备：将苯基甘油醚与醛化多糖糖单元的摩尔比为1∶2～50投料，在1M氢氧化钠溶液中室温反应10-48h，将产物在乙醇中沉降，再对去离子水透析，10～144h，冷冻干燥得苯氧基改性醛化多糖；2)载药微球制备：(1)透析法a.将脂溶性药物与可生物降解聚合物和双亲性改性醛化多糖按重量比为1∶0.5～100∶0.5～100共溶于1～1,000体积份的二甲基亚砜或N，N-二甲基甲酰胺中，室温下搅拌形成均相体系；所述的脂溶性药物包括：卡氮芥、消炎痛、环孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、红霉素或阿苯达唑；所述的可生物降解聚合物包括：相对分子质量5,000～100,000的聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯或聚乳酸-聚乙醇酸共聚物；所述的双亲性改性醛化多糖选自相对分子质量10,000～1000,000的醛化葡聚糖或淀粉，或普鲁兰经胆固醇、胆酸或苯氧基疏水改性形成物；b.将上述共溶体系用截留分子量7,000～50,000的半透膜在4～25℃下对去离子水透析1～144h，得到表面含醛基的载药可生物降解聚合物微粒；(2)乳液法a.将脂溶性药物与聚合物按重量比为1∶0.5～100共溶于1～1,000体积份的丙酮、二氯甲烷或上述二者的混合溶液中形成油相，所述的脂溶性药物包括：卡氮芥、消炎痛、环孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、红霉素或阿苯达唑；所述的可生物降解聚合物包括：相对分子质量5,000～200,000聚3-羟基丁酸酯、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或尼龙；b.按脂溶性药物与双亲性改性醛化多糖重量比为1∶0.5～100，将脂溶性药物和双亲性改性醛化多糖溶于1～1,000体积份的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲溶液中，得水相，所述的脂溶性药物包括：卡氮芥、消炎痛、环孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、红霉素或阿苯达唑；所述的双亲性改性醛化多糖选自相对分子质量10,000～1,000,000的醛化葡聚糖或淀粉，或普鲁兰经胆固醇、胆酸或苯氧基疏水改性；c.在4～25℃下将步骤a制得油相在转速500～1,200转/分的搅拌下快速注入步骤b制得水相中并继续在磁力条件下搅拌至粒子固化为止；3)将步骤2)制得的微球水溶液以10,000～16,000rpm离心，去除上清液，再将离出微球超声分散于同体积份的pH为7.4～9.18的碳酸钠-碳酸氢钠的缓冲溶液中，形成质量浓度为0.2～2.0mg/mL的微球溶液；4)按体积比1∶0.1～2.0，将pH为7.4～9.18的微球溶液滴加溶有0.1～2.0mg/mL的两种或两种以上生物因子的pH为7.4～9.18碳酸钠-碳酸氢钠的缓冲溶液中，孵化1～5h，所述生物因子包括转铁蛋白、兔IgG、表皮生长因子受体EGFR、转铁蛋白受体CD71、单抗OX26、内皮生长因子和神经生长因子；5)在4～25℃下向孵化液中加入0.2～1mL的0.01mol/L的硼氢化钠溶液，还原未反应的醛基和生成的西夫碱；在10,000～16,000rpm下离心，用去离子水洗涤。 |
