栉孔扇贝病原类立克次氏体的原位杂交检测方法及其试剂盒

摘要

本发明涉及一种栉孔扇贝病原类立克次氏体的原位杂交检测方法及用于该法的试剂盒。该法包括如下步骤：根据栉孔扇贝类立克次氏体在细菌分类学上具有保守功能的16S rDNA序列中的三段特有的DNA序列设计合成了地高辛标记的三条寡核苷酸探针，该特异探针与栉孔扇贝组织切片中类立克次氏体16s rRNA杂交结合后通过免疫学的抗原抗体反应扩大信号，然后经酶反应显色。该检测方法能直观地将病原检测与其病理变化结合起来；在高效、准确检测类立克次氏体的同时可由样本切片上分析感染率和感染强度；由于探针与16s rRNA的杂交是特异的，且信号经过了逐级放大，所以远较常规的染色观察检测灵敏、精确；而且检测结果杂交显色后的切片可长期保存。

主权项

1.一种栉孔扇贝病原类立克次氏体的原位杂交检测方法，其包括如下步骤：(1)用地高辛标记的特异的探针与栉孔扇贝组织切片中类立克次氏体16s rRNA杂交结合；(2)进行原位杂交检测：a.通过进一步的免疫学抗原抗体反应扩大信号：所述的地高辛标记的探针结合生物素化鼠抗地高辛，再结合链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物，最后再结合生物素化过氧化物酶；b.经酶反应显色；所述的特异的探针是根据栉孔扇贝类立克次氏体在细菌分类学上具有保守功能的16SrDNA序列中的三段特有的DNA序列设计合成的三条寡核苷酸探针，合成后于每一探针的3’末段标记地高辛；所述的三条寡核苷酸探针的序列为：(1)5’-CCAACACCGAATCCGAAGACCCGACGTGGTTTA-3’；(2)5’-GGTCCTTCTTATCCTGTTACTGTCATCATCC-3’；(3)5’-ACTAGAATACACCTCCGAAGAAGTGCATCTCGT-3’。