酶联免疫吸附分析步骤的快速热介导方法

摘要

本发明涉及为对诸如抗原、抗体等等微量生物分子进行测定而进行酶联免疫吸附分析的快速有效方法。本发明特别涉及抗原或抗体在所述活化表面的热介导固化，然后通过控制温度进行后续的ELISA步骤。所发明的方法将ELISA所需的总时间减少至3小时左右。所发明的ELISA方法快速、经济、可重复并且简单。所发明的方法对在临床诊断、分子生物学、农业、食品工程、环境科学等等中进行所需的ELISA相当有用。所发明的ELISA方法简单、省时且减少了耗时的步骤。这一方法具有自动化的潜力。

主权项

1.以使用活化固体支持物为特征的酶联免疫吸附分析的快速方法，其中所述方法包括：a.提供具有至少一个活化小孔的活化固体支持物，b.通过将生物分子溶解于包被缓冲液中来将选自抗原或抗体的所述生物分子加入到所述固体支持物的所述活化小孔中，并将所述小孔在40-80℃温度范围内加热10-70分钟，然后用适合的洗涤缓冲液彻底清洗所述小孔，c.通过向所述小孔加入封闭剂并将所述小孔在40-70℃温度范围内加热10-60分钟，以及用适合的洗涤缓冲液彻底清洗所述小孔，来对在步骤(b)中获得的含有固定化生物分子的所述小孔进行封闭，d.将溶于缓冲液中的所述对应抗体或抗原加入至在步骤(c)中获得的所述固化有抗原或抗体的小孔中，然后将所述小孔在40-80℃温度范围内加热10-70分钟，然后用洗涤缓冲液清洗，e.将溶于适合缓冲液中的适合酶-轭合物加入至步骤(d)中获得的所述小孔中，并将所述小孔在40-80℃温度范围内加热20-70分钟，然后用洗涤缓冲液清洗，f.向步骤(e)中获得的所述小孔中加入底物-染料-缓冲液并在黑暗中保持4-10分钟，然后加入终止溶液并通过分光光度计在合适的波长检测所述溶液的光密度。