高亲和力抗肿瘤坏死因子单克隆抗体的可变区基因及其制备

摘要

本发明公开了一种高亲和力抗肿瘤坏死因子(TNF)单克隆抗体(F6 mAb)的可变区基因的制备方法。用重组人TNF免疫BALB/c小鼠，制备一组小鼠抗人TNF单克隆抗体。应用间接ELISA方法筛选出高亲和力的F6 mAb。体外阻断实验证实，F6 mAb具有较高中和活性。克隆该单克隆抗体轻链可变区基因，获得该单克隆抗体轻链可变区基因序列和氨基酸序列，确认该基因序列和蛋白序列的惟一性。编码该可变区的基因序列在构建对炎症、自身免疫性疾病等有治疗作用的嵌合抗体和人源化抗体等方面有巨大的潜在价值。高亲和力F6 mAb可制备测定体液中TNF的ELISA试剂盒，在炎症、自身免疫性疾病的诊断方面有广泛的应用价值。另外，高亲和力F6 mAb可用于制备纯化重组TNF的亲和层析柱。

主权项

1.一种高亲和力抗肿瘤坏死因子单克隆抗体的可变区基因，其特征在于，基因序列和氨基酸序列如下：10 ctgacccagtctccatcctccctggctatgtcagtaggacagaag L T Q S P S S L A M S V G Q K55 gtcactatgaactgcaagtccagtcagagccttttaaatagttac V T M N CK S S Q S L L N S Y 100 actcagaagaactatttggcctggtaccagcagaaaccaggacag T Q K N Y L A W Y Q Q K P G Q145 tctcctaaacttctggtatactttgcatccactagggagtctggg S P K L L V YF A S T R E S G190 gtccctgatcgcttcatgggcagtggatctgggacagatttcact V P D R F M G S G S G T D F T235 cttaccatcagcagtgtgcagactgaagacctggcagattacttc L T I S S V Q T E D L A D Y F280 tgtcagcaacattataggattccattcacgttcggctcggggacc CQ Q H Y R I P F T F G S G T325 aagctggagatctaa 339 K L E I * 。