脑钠肽（BNP）制备方法

摘要

本发明公开了一种脑钠肽(BNP)的制备方法，为克服传统提取BNP方法成本高、收率低，目的蛋白容易变性，材料来源有限等诸多缺陷，本发明在制备BNP过程中，用PCR技术扩增目的基因，以Pet32a作为载体质粒，酶切定向插入BNP目的基因后形成重组质粒，以大肠杆菌DH5α，BL21(DE3)作为表达菌株，以His柱作为纯化柱子分离纯化目的蛋白。这种制备方法既可方便检测，又可增强重组蛋白的稳定性。运用本发明技术获得的BNP通过免疫学方法制成诊断试剂盒，可快速、准确、特异地诊断和鉴别诊断许多心血管疾病。

主权项

1.脑钠肽(BNP)的制备方法，其特征在于以下步骤：(1)采用PCR技术将表达BNP的目的基因扩增，并纯化其产物；(2)将纯化的PCR产物于BamH I与Hind III双酶切后定向插入经同样双酶切的pet32a，获得重组质粒Pet32a+BNP；(3)将重组质粒Pet32a+BNP转化至大肠杆菌DH5a，经培养扩增，抽提纯化，测序分析，获测序正确的重组质粒；(4)将测序正确的重组质粒转化至BL21DE30菌，在30℃，0.1mM IPTG条件下表达重组蛋白；(5)将表达重组蛋白的活化菌株接种到2-YT培养基恒温振荡培养，进行摇瓶实验，工程菌在发酵罐中高密度发酵，种子菌按5％比例接种，在低溶氧条件下诱导，放罐，离心得菌体；(6)将离心得到的菌体沉淀进行细胞裂解，洗涤出包涵体，溶解包涵体，His柱过柱纯化。