一种抗玉米螟转基因超甜玉米再生体系及其建立方法

摘要

本发明提供了一种抗玉米螟转基因超甜玉米再生体系及其建立方法，其建立方法包括下述步骤：超甜玉米愈伤组织的诱导；胚性愈伤组织的建立；胚性愈伤组织细胞的基因枪转化；转化后愈伤组织的培养与筛选；植株分化再生与移栽。该建立方法的超甜玉米细胞转化再生率较高，不仅提供了一种超甜玉米细胞转化再生体系，而且能够高效稳定地获得基因转化再生植株。

主权项

1、一种抗玉米螟转基因超甜玉米再生体系的建立方法，其特征在于包括下述步骤：(1)超甜玉米愈伤组织的诱导：取授粉生长9～11天的超甜玉米果穗，未成熟种子的幼胚长度为1.0～2.0mm，剥除果穗外苞叶，幼穗用70～75％酒精表面消毒，无菌水漂洗1～2次，再用15～20％次氯酸钠溶液或10～15g/L次氯酸钙溶液浸泡20～25分钟后，无菌水冲洗3～4次；无菌条件下挑出幼胚，接种于诱导培养基，25～27℃暗培养诱导愈伤组织；(2)胚性愈伤组织的建立：上述幼胚在诱导培养基上生长3～4周，挑取胚性愈伤组织作转化受体或转接于继代培养基上继代培养，每3～4周转移1次；(3)胚性愈伤组织细胞的基因枪转化：用基因枪轰击胚性愈伤组织细胞前4～6小时，选取胚性愈伤组织转移到含高渗培养基的培养皿中；将DNA微弹装载到载片上就绪，将胚性愈伤组织置于基因枪的样品室进行基因枪转化；(4)转化后愈伤组织的培养与筛选：轰击后的胚性愈伤组织继续在原高渗培养基上培养16～18小时，然后转移到继代培养基上在25～27℃黑暗条件下恢复培养；将恢复培养后的胚性愈伤组织转移到选择培养基上进行筛选，每2～3周转移1次，挑选生长良好的抗性愈伤组织进行下一轮筛选；(5)植株分化再生与移栽：在26℃，每日至少16小时光照条件下，将生长良好的抗性愈伤组织转入分化培养基诱导胚状体；当出现绿芽后转入不含激素的分化培养基上生长，诱导出小苗后再转入生根壮苗培养基产生根系；当发育成5～8cm高的完整小苗后经练苗，选择生长健壮的植株移栽到基质为栽培花卉的有机土中，保湿，2周后将植株移栽到田间。