| 主权项 |
1.一种野生型N-胺甲醯基-D-胺基酸醯胺水解之突 变株,其包含对应于SEQ ID NO:2胺基酸序列中,一或两 个选自Val44及Ala302所组成之群之残基经Cys取代之 胺基酸序列,其中该突变株相较于该野生型N-胺甲 醯基-D-胺基酸醯胺水解,其热稳定性增加。 2.根据申请专利范围第1项之突变株,其中该野生型 N-胺甲醯基-D-胺基酸醯胺水解系为放射土壤杆 菌之N-胺甲醯基-D-胺基酸醯胺水解或其功能同 等物。 3.根据申请专利范围第2项之突变株,其中该放射土 壤杆菌系为放射土壤杆菌CCRC14924株或放射土壤杆 菌KNK712株。 4.根据申请专利范围第2项之突变株,其中该功能同 等物具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列。 5.根据申请专利范围第1至4项中任一项之突变株, 其中该取代系将Val44残基以Cys取代。 6.根据申请专利范围第1至4项中任一项之突变株, 其中该取代系将Ala302残基以Cys取代。 7.根据申请专利范围第1至4项中任一项之突变株, 其中该取代系将Val44及Ala302残基以Cys取代。 8.一种编码申请专利范围第1至4项中任一项之突变 株之DNA分子。 9.一种重组载体,其包含申请专利范围第8项之DNA分 子。 10.一种宿主细胞,其系经由申请专利范围第9项之 重组载体所转形。 11.根据申请专利范围第10项之宿主细胞,其系为原 核细胞或真核细胞。 12.根据申请专利范围第11项之宿主细胞,其中该原 核细胞系为大肠杆菌。 13.一种制备制备热稳定N-胺甲醯基-D-胺基酸醯胺 水解之方法,其包含培养根据申请专利范围第10 至12项中任一项之宿主细胞,以表现热稳定N-胺甲 醯基-D-胺基酸醯胺水解。 14.根据申请专利范围第13项之方法,其中该宿主细 胞系为原核细胞或真核细胞。 15.根据申请专利范围第14项之方法,其中该原核细 胞系为大肠杆菌。 16.根据申请专利范围第13项之方法,其进一步包含 纯化该热N-胺甲醯基-D-胺基酸醯胺水解之步骤 。 17.一种制备D-p-羟苯基甘胺酸(D-p-HGP)之方法,其包 含将N-胺甲醯基-D-p-羟苯基甘胺酸(Nca-HPG)与申请专 利范围第1至4项中任一项之突变株接触。 18.一种制备D-p-羟苯基甘胺酸(D-p-HGP)之方法,其包 含将N-胺甲醯基-D-p-羟苯基甘胺酸(Nca-HPG)与根据申 请专利范围第10至12项中任一项之宿主细胞接触。 图式简单说明: 图1显示酵素热稳定半生期(Tm)之测定结果。 图2显示野生型与对照组H58Y相对活性测试比较之 结果。 图3显示野生型与突变株V44C、A302C及V44C/A302C相对 活性测试比较之结果。 图4显示野生型与对照组H58Y酵素活性存活测试比 较之结果。 图5显示野生型与突变株V44C、A302C及V44C/A302C酵素 活性存活测试比较之结果。 |
