培养新疆雪莲毛状根和再生苗及生产紫丁香甙的方法

摘要

一种培养新疆雪莲毛状根和再生苗及生产紫丁香甙的方法：取新疆雪莲种子萌发后的绿色子叶置于诱导丛生苗培养基上进行培养，诱导培养获得丛生芽；丛生芽置于苗生长培养基，进行单株培养；单株移置于诱根培养基培养，获得下端长有实生根的再生苗；有实生根的苗的外植体切段(叶片、叶柄和根段)，置于预培养培养基上暗培养，经发根农杆菌介导进行转化，其外植体于弱光培养诱导发根，出现的毛状根接入筛选培养基上继代培养，选择抗Km且PCR检测显阳性的发根根系，切取根尖1－2cm用于进行液体扩大培养和再生苗的获得。毛状根及其再生苗培养物用于干燥、粉碎、有机溶剂分离、提取、制备雪莲紫丁香甙。

主权项

1、一种培养新疆雪莲毛状根和再生苗的方法，其步骤如下：a)萌发新疆雪莲的无菌种子，取子叶柄，置于诱导丛生苗培养基上诱导培养获得丛生苗；培养基MS+BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)，25℃，光强2000lux，24小时光照；b)丛生苗置于苗生长培养基MS+BA(1.0mg/L)+NAA(0.1/L)，25℃，光强2000lux，24小时光照，25天继代一次进行单株培养；c)单株移置于诱根培养基(1/2MS+0.5mg/L IAA)，获得下端长有实生根的苗；d)有实生根苗的叶片切段为外植体，置于预培养基MS+NAA(2.0mg/L)+BA(0.5mg/L)中暗培养2-4天，经发根农杆菌介导进行转化，其外植体于弱光培养诱导毛状根；e)诱导出的毛状根接入筛选培养基1/2MS(3％蔗糖)+Cef(300mg/L)+GA3(0.5mg/L)+Km(50mg/L)上再培养，选择抗Km且PCR检测显阳性的根系，切取根尖用液体扩大培养再生苗；f)切取根尖接种于MS固体培养基，获得来自毛状根的再生芽；毛状根的再生芽接种于MS培养基，再生芽陆续生根最终获得毛状根的再生苗。