一种微囊藻毒素分离纯化的方法

摘要

本发明公布了一种微囊藻毒素分离纯化的方法。本方法以富营养化湖泊滇池的水华蓝藻作为主要原料，经有机溶剂提取、快速色谱初步分离，最后用C₁₈反相制备液相色谱法实现微囊藻毒素MC-RR和[Dha⁷]MC-RR的分离纯化。方法采用等梯度洗脱，稳定性好，在制备色谱条件下，二种毒素可实现完全分离，一次上样量可高达200μg，得到的MC-RR和[Dha⁷]MC-RR纯度用HPLC-UV检测达95％以上。

主权项

1、一种微囊藻毒素分离纯化的方法，它包括下列步骤：A、藻毒素提取：称取干藻粉，按20～50ml/g的比例加入75％甲醇，室温下置于摇床上振荡40～120min或在搅拌器上连续搅拌40～120min，取出后以3000～4500r/min的转速离心10～30min，取出上清液；B、藻毒素初步纯化：将上清液于30～40℃旋转蒸发浓缩至油状，按Edwards提出的快速色谱法进行微囊藻毒素的初步纯化，收集含MC-RR和[Dha7]MC-RR的组分，于30～40℃旋转蒸发浓缩至干，用2～20ml 70％甲醇定容；C、制备色谱柱：Hypersil ODS-BP C18反相色谱柱，内径10～30mm，长250～300mm；D、制备色谱条件：流动相为甲醇∶0.01％三氟乙酸＝68∶32等梯度洗脱，流速6～20ml/min，柱温20～40℃，进样量1～5ml，检测波长238nm，检测器为制备色谱检测池，最高耐压1000psi；E、MC-RR和[Dha7]MC-RR混合物检测：采用如下色谱条件，MC-RR和[Dha7]MC-RR为同一色谱峰，Hypersil ODS-BP 5μm，4.6×250mm，流动相：甲醇∶0.05％三氟乙酸＝65∶35等度洗脱，流速1ml/min，检测波长238nm，进样量10μL；F、分离纯化后的MC-RR和[Dha7]MC-RR的检测：采用如下色谱条件，MC-RR和[Dha7]MC-RR可以完全分离，Hypersil ODS-BP 5μm，4.6×250mm，流动相：甲醇∶0.01％三氟乙酸＝68∶32等梯度洗脱，流速：1ml/min，检测波长238nm，进样量10μL。