禽流感病毒多重PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种鉴定病毒，特别是鉴定禽流感H5、H9亚型病毒的检测方法。用Trizol kit提取样本基因RNA，再进行反转录合成cDNA，然后进行一次性PCR扩增特定的多个基因，最后电泳鉴定。由于单个疑似病例样本中的特征基因数量极少，本发明通过将样本的RNA反转录合成cDNA，再一次性同时对可能存在的NP、H₅A、H₉A基因扩增，形成大量的基因复制片段，比较方便，一次就能鉴定是否为禽流感，以及属于H5或H9亚型作出判断。本发明较经典方法的病毒分离、鉴定和血清学分型试验方法快速、准确。

主权项

1、禽流感病毒多重PCR检测方法，其特征在于用Trizol kit提取样本基因RNA，再进行反转录合成cDNA，然后进行一次性PCR扩增特定的多个基因，最后电泳鉴定；其中，采用引物NP-Forward和NP-Reverse，对NP基因进行扩增，所述NP-Forward：5’-[CAG ATA TTG GGC TAT AAGGAC]-3’，所述NP-Reverse：5’-[GCA TTG TCT CCG AAG AAA TAA G]-3’；采用引物H5A-Forward和H5A-Reverse对H5A基因进行扩增，所述H5A-Forward：5’-[ACA CAT GCT CAG GAC ATA CT]-3’，所述H5A-Reverse：5’-[CTC TGA TTC AGT GTT GAT GT]-3’；采用引物H9A-Forward和H9A-Reverse对H9A基因进行扩增，所述H9A-Forward：5’-[CTC CACACA GAG CAC AAT GG]-3’，所述H9A-Reverse：5’-[GTT GTC ACA CTTGTT GTT GT]-3’。