半滑舌鳎雌性特异AFLP片段及遗传性别鉴定的PCR方法

摘要

一种半滑舌鳎雌性特异AFLP片段及遗传性别鉴定的PCR方法，包括雌性特异AFLP片段的回收、AFLP片段的克隆、序列分析以及半滑舌鳎遗传性别鉴定的PCR方法；建立了分离和克隆半滑舌鳎雌性特异AFLP片段的技术，获得了雌性特异DNA片段，设计了特异的引物，将AFLP标记转化成SCAR标记，创建了半滑舌鳎遗传性别鉴定的PCR技术。本发明首次分离到半滑舌鳎雌性特异的DNA片段，查明了其DNA序列，建立了半滑舌鳎遗传性别鉴定的PCR分析技术。本发明具有先进、高效、准确、可靠的特点，在半滑舌鳎性别控制和单性苗种生产中具有重要应用价值，同时在其它鱼类遗传性别鉴定和性别控制研究中也具有应用前景。

主权项

1、一种半滑舌鳎雌性特异AFLP片段的克隆与序列分析，其特征在于它的技术内容包括如下三个方面：1)雌性特异AFLP片段的回收；2)雌性特异AFLP片段的克隆；3)雌性特异AFLP片段的序列分析：1)、雌性特异AFLP片段的回收：选取能扩增出382bp雌性特异AFLP条带的引物组合，进行AFLP扩增，扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，用刀片切下含有382bp雌性特异DNA条带的聚丙烯酰胺凝胶，溶解后回收目的片段备用；2)、雌性特异AFLP片段的克隆：将回收的雌性特异AFLP片段，克隆到pMD 18-T载体中，采用标准的方法进行连接和转化，采用常规PCR法筛选含有目的片段的克隆，用琼脂糖凝胶电泳检测产物的长度，符合预期长度的样品可以视为阳性克隆；3)、雌性特异AFLP片段的序列分析选取阳性克隆，用ABI3730测序仪进行序列分析；将来自8个阳性克隆的雌性特异AFLP标记的核苷酸序列，用DNAMAN Version 4.0进行多序列比对，其同源性为99.37％，表明各个个体得到的条带是同一个序列；半滑舌鳎雌性特异AFLP片段的序列为： Primer CseF382N1 ATTCACTGACCCCTGAGAGCGGCGAAGTTAGGCAGTTCGCTGAGTCCAGTGCAAACATCAACGTTCTTATATGCCAACAGACTTTAGAAGCCAAGAATTATGTGTCATATTTGTTTTGACTCCAGGTTCAGTTTACTTAGGACAAACTCAGGGATTTGAAATGACGAGCAACATCTTATCGCCTCAAGTGCACATGGGTAAAAAGATCCTTCCGAGCCAGGGCTGGAGAAAGCAGGCTTCTCAGGTGACACAGTGGGTTTGGCCGAGACTAGTTTTACAATGATGGTGCCACAAAAAAAGAAAGGGAAACTCTATGAGTGGACACAGACTGAGACATTTGTCGTGTGTGA G Primer CseF382C1