一种固体培养获得针叶树种胚状体的方法及其培养基

摘要

本发明公开了一种固体培养获得针叶树种胚状体的方法及其培养基。本发明所提供的针叶树种胚状体固体培养基，包括诱导培养基、增殖培养基和成熟培养基，所述成熟培养基分为成熟培养基1或成熟培养基2。应用上述固体培养基，固体培养获得针叶树种胚状体的方法，包括如下步骤：诱导培养、增殖培养和成熟培养，得到所述胚状体。本发明通过对培养各阶段培养基组分的优化，提高了胚性愈伤组织质量，早期原胚质量大大改善，与现有技术相比，体细胞胚培养发生状况取得了重大突破。

主权项

1、一种针叶树种胚状体固体培养基，包括诱导培养基、增殖培养基和成熟培养基，所述成熟培养基分为成熟培养基1或成熟培养基2；其中，所述诱导培养基含有下述组分，pH为5.4-6.2：KNO3 1836-2836mg/L，NH4NO3 243-360mg/L，KH2PO4 70-130mg/L，CaCl2.2H2O 300-450mg/L，MgSO4.7H2O 130-250mg/L，H3BO3 2-11mg/L，ZnSO4.7H2O 3-7mg/L，MnSO4.H2O 6.5-10.5mg/L，Na2MoO4.2H2O 0.11-0.21mg/L，KI 0.28-0.63mg/L，CuSO4.5H2O 0.01-0.035mg/L，CoCl2 0.01-0.035mg/L，FeSO4.7H2O 13-21mg/L，Na2.EDTA.H2O 15-27mg/L，肌醇 50-1500mg/L，维生素B1 0.4-0.6mg/L，谷氨酰胺 400-700mg/L，蔗糖 20,000-55,000mg/L，2，4-二氯苯氧乙酸 0.3-2.7mg/L，酸水解酪蛋白 350-1050mg/L，6-苄氨基嘌呤 0.05-3.1mg/L，激动素 0.05-2.6mg/L，琼脂 2,500-7,000mg/L；所述增殖培养基含有下述组分，pH为5.4-6.2：KNO3 1836-2836mg/L，NH4NO3 243-360mg/L，KH2PO4 70-130mg/L，CaCl2.2H2O 300-450mg/L，MgSO4.7H2O 130-250mg/L，H3BO3 2-11mg/L，ZnSO4.7H2O 3-7mg/L，MnSO4.H2O 6.5-10.5mg/L，Na2MoO4.2H2O 0.11-0.21mg/L，KI 0.28-0.63mg/L，CuSO4.5H2O 0.01-0.035mg/L，CoCl2 0.01-0.035mg/L，FeSO4.7H2O 13-21mg/L，Na2.EDTA.H2O 15-27mg/L，肌醇 50-1500mg/L，维生素B1 0.4-0.6mg/L，谷氨酰胺 400-700mg/L，蔗糖 20,000-55,000mg/L，2，4-二氯苯氧乙酸 0.3-2.7mg/L，酸水解酪蛋白 350-1050mg/L，6-苄氨基嘌呤 0.05-3.1mg/L，琼脂 2,500-7,000mg/L；所述成熟培养基1含有下述组分，pH为5.4-6.2：KNO3 1836-2836mg/L，NH4NO3 243-360mg/L，KH2PO4 70-130mg/L，CaCl2.2H2O 300-450mg/L，MgSO4.7H2O 130-250mg/L，H3BO3 2-11mg/L，ZnSO4.7H2O 3-7mg/L，MnSO4.H2O 6.5-10.5mg/L，Na2MoO4.2H2O 0.11-0.21mg/L，KI 0.28-0.63mg/L，CuSO4.5H2O 0.01-0.035mg/L，CoCl2 0.01-0.035mg/L，FeSO4.7H2O 13-21mg/L，Na2.EDTA.H2O 15-27mg/L，肌醇 50-1500mg/L，维生素B1 0.4-0.6mg/L，尼克酸 0.05-1.5mg/L，维生素B6 0.01-0.5mg/L，谷氨酰胺 400-700mg/L，蔗糖 20,000-55,000mg/L，PEG4000 15000-190000mg/L，酸水解酪蛋白 350-1050mg/L，脱落酸 7-150mg/L，琼脂 2,500-7,000mg/L；所述成熟培养基2含有下述组分，pH为5.6-5.9：KNO3 1836-2836mg/L，NH4NO3 243-360mg/L，KH2PO4 70-130mg/L，CaCl2.2H2O 300-450mg/L，MgSO4.7H2O 130-250mg/L，H3BO3 2-11mg/L，ZnSO4.7H2O 3-7mg/L，MnSO4.H2O 6.5-10.5mg/L，Na2MoO4.2H2O 0.11-0.21mg/L，KI 0.28-0.63mg/L，CuSO4.5H2O 0.01-0.035mg/L，CoCl2 0.01-0.035mg/L，FeSO4.7H2O 13-21mg/L，Na2.EDTA.H2O 15-27mg/L，肌醇 50-1500mg/L，维生素B1 0.4-0.6mg/L，谷氨酰胺 400-700mg/L，蔗糖 20,000-55,000mg/L，PEG4000 15000-190000mg/L，酸水解酪蛋白 350-1050mg/L，脱落酸 7-150mg/L，琼脂 2,500-7,000mg/L。