相分离法纯化质粒DNA方法

摘要

本发明涉及一种采用新型的两相法使DNA与其他生物大分子分离开来。其特征在于按如下操作步骤：1)加液悬浮；2)加碱裂解；3)中和凝集；4)成相分离；5)过滤回收。用本发明相分离技术将质粒DNA分离纯化，具有分离纯度高，速度快(约10-20分钟完成)的优点，而且能同时分离到不同的细菌组分，为这些细菌组分的分离纯化提供了便利的条件。

主权项

1、一种相分离法纯化质粒DNA方法，其特征在于按如下操作步骤：1)加液悬浮：含质粒的细菌液离心弃上清后，加细菌悬浮液使彻底悬浮；2)加碱裂解：加细菌裂解液温和混匀，使菌体充分裂解，形成透亮溶液；3)中和凝集：加中和缓冲液温和混匀，至形成凝集块；所述的中和缓冲液为硫酸铵或氯化铯380～480克，盐酸胍28～98克，磷酸二氢钠16～18克，加水至1升；4)成相分离：加分相溶液温和混匀，形成乳浊液，离心，弃上相，将下相转入微量滤器滤去残留的相间沉淀；所述的分相溶液为乙醇∶异丙醇(v/v)＝2～10∶1。5)过滤回收：在滤液中加DNA结合溶液转入DNA制备管，用负压或离心法使溶液滤过硅胶膜，使DNA结合到硅胶膜上而得到浓缩和回收。