一种检测猪瘟病原的方法

摘要

本发明提供了一种检测猪瘟病毒的检测方法，步骤包括，按照扩增猪瘟病毒基因的方法，设计4条特异性寡核苷酸引物(C1～C4)和1条生物素标记的杂交捕获探针(C5)；从被检样品中按提取猪瘟病毒RNA的方式提取RNA；以提取的RNA为模板，反转录合成cDNA；用所述4条特异性寡核苷酸引物(C1～C4)，进行套式聚合酶链式扩增反应扩增，并将其产物用地高辛标记的dUTP标记；将所述探针与扩增产物杂交并捕获到微载体板上；加入过氧化物酶标记的抗地高辛抗体和底物进行免疫显色；测定405nm OD值(A₄₀₅)并判读结果，A₄₀₅≥0.1者为阳性。该方法可用于猪瘟的早期诊断和隐性带毒者的查毒。

主权项

1、一种检测猪瘟病毒的方法，其特征在于：按照扩增猪瘟病毒基因的方法，设计4条特异性寡核苷酸引物(C1～C4)和1条生物素标记的杂交捕获探针C5，其中引物和探针分别为：引物1C1正向GCTAGCCATGCCCTTAGTAGGACT，引物2C2正向CCTGAGTACAGG(A/G)(C/T)AGTCGTCA，引物3C3反向TGGGCCTCTGCAGCACCCTATCAGG，引物4C4反向CAACTCCATGTGCCATGTACAGCA，探针C5生物素-TCACATTA(C/T)GTGATAAA(A/G)GTACGA。从被检样品中按提取猪瘟病毒RNA的方式提取RNA；以提取的RNA为模板，反转录合成cDNA；用所述4条特异寡核苷酸引物C1～C4，进行套式聚合酶链式扩增反应扩增，其中先将所述反转录产物加入含有引物1和引物4的PCR体系中进行第一次扩增，再以第一次扩增的产物为模板，使用引物2和引物3进行第二次扩增，两次扩增的循环数均为35次，最后将产物用地高辛标记的dUTP标记；将所述探针与扩增产物杂交并捕获到微量载体板孔中；加入过氧化物酶标记的抗地高辛抗体和底物进行免疫显色；测定405nmOD值A405并判读结果，A405≥0.1者为阳性。