以肿瘤CHK1为药靶抗癌重组腺病毒的构建方案及用途

摘要

本发明公开了一种人工改造人类5型腺病毒(ADV5)的构建方案，以及用该方案获取的重组腺病毒构建体在肿瘤治疗中的具体用途。用PCR扩增定点缺失、同源重组、转染、腺病毒单克隆纯化等技术，获得一种重组腺病毒构建体，其特征在于：ADV5基因组E1A保守序列2(CR2)编码序列24个碱基缺失；ADV5 E3区28532-29360nt缺失；并在该区域反向插入部分CHK1 cDNA片段。该重组腺病毒构建体能选择性地在肿瘤细胞内复制增殖；插入的反义CHK1 cDNA片段在肿瘤细胞内特异性表达；对肿瘤细胞具有强效旁观者效应。从而特异性杀灭肿瘤细胞，同时对正常细胞无杀灭效应。该构建体在肿瘤治疗药物、诊断试剂的制备中具有独特的实用价值，同时也为肿瘤基因治疗提供了理想的基因靶点特异性治疗应用途径。

主权项

1.一种重组腺病毒构建体，其命名及技术特征在于：该构建体命名为Δ923-946ADV5/ASCHK1，它缺失了ADV5923-946nt序列CTT ACC TGC CAC GAGGCT GGC TTT，该序列编码E1A蛋白122至129位氨基酸，同时，它缺失了ADV5 E3区28532-29360nt，在该缺失区域引入一个ClaI酶切位点，在ClaI酶切位点中反向插入相当于CHK1 mRNA 853-250nt的外源性CHK1cDNA片段，其他基因组结构与野生型ADV5完全相同。