普氏原羚粪便DNA的提取方法

摘要

普氏原羚粪便DNA的提取方法：取少许粪便悬浮于生理盐水，在离心后的上清液A中加入溶菌酶，中速离心取沉淀B；向B中加入含SDS和蛋白酶K的Tris－HCl、EDTA、NaCl的混合液，得到溶液C；55℃的水浴3.5－4小时；然后对溶液C进行2次抽提获得DNA样品F；最后用70％的冰乙醇洗涤F 2次，真空干燥F后溶于适量的缓冲液中于－20℃保存。

主权项

1.普氏原羚粪便DNA的提取方法，其特征是：取0.2克低温保存的粪便悬浮于2ml 0.8％的生理盐水，4℃低速离心5分钟，取上清得到溶液A；向A中加溶菌酶，室温放置5-7分钟，中速离心5分钟，取沉淀得到B；向B中加入0.5ml含有三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris-HCl)、乙二胺四乙酸(EDTA)、氯化钠(NaCl)的混合液，其中还含十二烷基苯磺酸钠(SDS)和蛋白酶K，得到溶液C；55℃的水浴3.5-4小时；然后对溶液C进行2次抽提：第一次在C中加入等体积饱和酚，中速离心10分钟后抽提上清液得到溶液D，第二次在D中加入等体积氯仿，中速离心10分钟后抽提上清液得到溶液E，在E中加入1/10体积的醋酸钠溶液和2.5倍体积的冰无水乙醇，-20℃过夜；高速离心15分钟后获得DNA样品F；最后用70％的冰乙醇洗涤F两次，真空干燥F后溶于适量的缓冲液中于-20℃保存。