记录蛋白质相互作用及功能关系的检测系统

摘要

本发明公开了复杂蛋白质相互作用和蛋白质功能关系的检测方法，以及实施这些方法所用的试剂。

主权项

1、一种检测蛋白质-蛋白质相互作用的方法，该方法包含：(a)提供一个宿主细胞，它含有(i)一个第一报道基因，其可通过操作与包括第一蛋白质结合位点的DNA序列相连；(ii)一个第二报道基因，其可通过操作与包括第二蛋白质结合位点的DNA序列相连；(iii)一个表达第一融合蛋白的第一融合基因，所述第一融合蛋白包括一个与结合部分共价结合的第一蛋白质，该结合部分能特异性结合到所述第一蛋白质结合位点上；(iv)一个表达第二融合蛋白的第二融合基因，所述第二融合蛋白包括一个与结合部分共价结合的第二蛋白质，该结合部分能特异性结合到所述第二蛋白质结合位点上；和(v)一个表达第三融合蛋白的第三融合基因，所述第三融合蛋白包括一个与基因活化部分共价结合的第三蛋白质；(b)测量所述第一报道基因的表达输出，作为所述第一蛋白质和第三蛋白质之间相互作用的量度；(c)测量所述第二报道基因的表达输出，作为所述第二蛋白质和第三蛋白质之间相互作用的量度；(d)解释步骤(b)和步骤(c)的表达输出结果，由此(i)所述第一报道基因和第二报道基因二者输出的增加指示所述第三融合蛋白与所述第一和第二融合蛋白相互作用；(ii)所述第一报道基因输出增加而第二报道基因输出不增加，指示所述第三融合蛋白与第一融合蛋白相互作用，而不与第二融合蛋白作用；(iii)所述第二报道基因输出增加而第一报道基因输出不增加，指示所述第三融合蛋白与第二融合蛋白相互作用，而不与第一融合蛋白作用；和(iv)所述第一或第二报道基因的输出均没有变化，指示所述第三融合蛋白不与所述第一或第二融合蛋白相互作用；(e)将所述步骤(b)和步骤(c)的表达输出结果与用下述宿主细胞测得的表达输出结果进行比较，所述宿主细胞是(i)一个第一比较宿主细胞，它含有(a)一个可通过操作与包括蛋白质结合位点的DNA序列相连的报道基因；(b)一个表达第一融合蛋白的第一融合基因，所述第一融合蛋白包括与能特异性结合到所述蛋白质结合位点上的结合部分共价结合的所述第一蛋白质；和(c)一个表达第二融合蛋白的第二融合基因，所述第二融合蛋白包括与基因活化部分共价结合的所述第三蛋白质；或者(ii)一个第二比较宿主细胞，它含有(a)可通过操作与包括蛋白质结合位点的DNA序列相连的报道基因；(b)一个表达第一融合蛋白的第一融合基因，所述第一融合蛋白包括与能特异性结合到所述蛋白质结合位点上的结合部分共价结合的所述第二蛋白质；和(c)一个表达第二融合蛋白的第二融合基因，所述第二融合蛋白包括与基因活化部分共价结合的所述第三蛋白质；或者(iii)所述第一比较宿主细胞和所述第二比较宿主细胞两者。