| 主权项 |
1.一种由一聚核酸所编码之多,该聚核酸系 选自下列组成的群组: (a)聚核酸,其编码包含序列识别编号:27所描绘之 胺基酸序列的多之至少胺基酸1至46、1至125或1 至284; 序列识别编号:27 (b)聚核酸,其包含序列识别编号:26所描绘编码该 多之至少胺基酸1至46、1至125或1至284的编码序 列; 序列识别编号:26 (c)聚核酸,其包含编码序列识别编号:27之胺基酸 残基1至46、17至46、1至96、17至96、47至96、17至125 、47至125、47至330或47至525的一核酸序列; (d)聚核酸,其编码一多,该多系衍生自由聚 核酸(a)、(b)或(c)所编码的多,该衍生自由聚核 酸(a)、(b)或(c)所编码的多系经由取代、删除 及/或加入一或多个胺基酸于由聚核酸(a)、(b)或 (c)所编码的胺基酸序列而得,其中该聚核酸编码 之多可调控Na+依赖型磷酸盐共同输送、维生素D 代谢及/或骨形成或矿物化作用; (e)聚核酸,其编码一可调控一功能的多,该功 能系选自由下列所组成之群组:磷酸盐代谢、维生 素D代谢、骨骼形成及骨骼矿物化,且该多包含 由(a)至(d)任一聚核酸所编码多中的细胞及/或 糖基胺基聚糖附着模体(motif)及/或骨骼矿物质模 体; (f)(a)至(e)中任一的聚核酸,其中该被编码的多 可形成同质二元体及/或非同质二元体;以及 (g)聚核酸,其核酸序列由于基因密码而与(a)至 (f)任一聚核酸的核酸序列为简并性。 2.如申请专利范围第1项之多,其进一步特征为其 具有选自下列所组成群组之特征: (a)于SDS-PAGE测量时,具有分子量于约60至75kDa之范围 ; (b)于bis-tris SDS-PAGE于pH7测量时,具有分子量约120kDa; (c)具有由Saos-2细胞(寄存编号ECACC 89050205)细胞培养 物所纯化的磷素糖化样式; (d)具有由使用编码磷素之核酸序列转染的细胞 系所产生的磷素糖化样式; (e)具有由其内生DNA被活化而表现磷素的细胞系所 产生的磷素糖化样式;以及 (f)不含糖化。 3.如申请专利范围第2项之多,其进一步特征为调 理一个选自由下列所组成之组群的功能:磷酸盐代 谢、维生素D代谢、骨骼形成以及骨骼矿物化。 4.一种单离的聚核酸,其编码一个如申请专利范 围第1至3项中任一项之多。 5.一种载体,其含有如申请专利范围第4项之聚核 酸。 6.一种寄主细胞,其系使用如申请专利范围第5项之 载体进行基因工程处理而得。 7.如申请专利范围第1至3项中任一项之多,其进 一步特征为具有一个选自由下列所组成的组群之 特征: (a)可向下调控钠依赖型磷酸盐之共同输送; (b)可向上调控肾脏25-羟基维生素D3-24-羟基; (c)可向下调控肾脏25-羟基-D-1--羟基; (d)可向上调控钠依赖型磷酸盐之共同输送; (e)可向下调控肾脏25-羟基维生素D3-24-羟基; (f)可向上调控肾脏25-羟基-D-1--羟基;及 (g)骨骼形成及矿物化。 8.一种单离抗体,其特异性结合至如申请专利范围 第1至3项中任一项之单离多。 9.一种药学组成物,其可用于治疗关于选自磷酸盐 代谢、维生素D代谢、骨骼形成及骨骼矿物化组成 的组群中之一个病症的医疗病情,该组合物包含一 个选自如下列所组成群组之治疗有效量的化合物: 如申请专利范围第1至3项中任一项之多及如申 请专利范围第4项之聚核酸。 10.一种于体外诊断一受测者之病理状况或对该病 理状况之易感性的方法,该病理状况系有关于一选 自由下列所组成群组的病症:磷酸盐代谢、维生素 D代谢、骨骼形成及骨骼矿物化,该方法包含: (a)决定如申请专利范围第4项之聚核酸是否存在 有突变;以及 (b)基于是否存在有该突变而诊断病理状况或对病 理状况的易感性。 11.一种用于治疗磷酸盐代谢病症的药学组成物,其 包含如申请专利范围第1至3项中任一项之多或 如申请专利范围第4项之聚核酸。 12.一种用于治疗血中磷酸盐过高症的药学组成物, 其包含如申请专利范围第1至3项中任一项之多 或如申请专利范围第4项之聚核酸。 13.一种用于治疗肾性骨发育不全、肾脏透析/透析 前血中磷酸盐过高症、续发性副甲状腺机能亢进 、囊性纤维性骨炎或痛风的药学组成物,其包含如 申请专利范围第1至3项中任一项之多或如申请 专利范围第4项之聚核酸。 14.一种用于治疗X联结血中磷酸盐过低性向佝偻症 ,带有尿中钙含量过高的遗传性血中磷酸盐过低性 佝偻症(HHRH),矿物化不足的骨病灶,青春期生长迟 滞,致癌性之血中磷酸盐过低性软骨病,肾脏磷酸 盐泄漏,肾性骨发育不全,松骨病,维生素D抗阻性佝 偻症,终端器官抗阻,肾脏梵可尼氏(Fanconi)症候群, 正常基因型佝偻症,巴吉特氏(Paget's)病,肾脏衰竭, 肾小管性酸中毒,囊性纤维症或热带口疮的药学组 成物,其包含如申请专利范围第1至3项中任一项之 多或如申请专利范围第4项之聚核酸。 15.一种用于治疗磷酸盐代谢障碍或骨骼矿物质流 失病症的组合式药学组成物,其包含如申请专利范 围第1至3项中任一项之多及锌-金属内切,而该 组合式药学组成物系供同时、分开或依序使用。 16.一种如申请专利范围第8项之抗体或其Fab或F(ab') 2片段,其可用于诊断一个受测者的病理状况或对 该病理状况的易感性,该病理状况系有关于一选自 由下列所组成群组的病症:磷酸盐代谢、维生素D 代谢、骨骼形成及骨骼矿物化,该诊断系利用侦测 如申请专利范围第1至3项中任一项之多。 17.一种由一聚核酸所编码之多,该聚核酸系 选自下列组成的群组: (a)聚核酸,其编码磷素多之一抗原决定基部份 ,该抗原决定基部份包含序列识别编号:27的1至46、 1至96、17至46、17至96、17至125、17至284、17至330、17 至525、47至96、47至284、47至330或47至525之胺基酸残 基; (b)聚核酸,其编码一可调控一功能的多,该功 能系选自由下列所组成之群组:磷酸盐代谢、维生 素D代谢、骨骼形成及骨骼矿物化,该多包含(a) 之聚核酸所编码多中的细胞及/或糖基胺基聚 糖附着模体及/或骨骼矿物质模体; (c)(a)之聚核酸,其中该被编码的多可形成同质 二元体及/或非同质二元体;以及 (d)聚核酸,其核酸序列由于基因密码而与(a)之 聚核酸的核酸序列为简并性。 18.如申请专利范围第17项之多,其进一步特征为 其具有选自下列所组成群组之特征: (a)于SDS-PAGE测量时,具有分子量于约60至75kDa之范围 ; (b)于bis-tris SDS-PAGE于pH7测量时,具有分子量约120kDa; (c)具有由Saos-2细胞(寄存编号ECACC 89050205)细胞培养 物所纯化的磷素糖化样式; (d)具有由使用编码磷素之核酸序列转染的细胞 系所产生的磷素糖化样式; (e)具有由其内生DNA被活化而表现磷素的细胞系所 产生的磷素糖化样式;以及 (f)不含糖化。 19.如申请专利范围第18项之多,其进一步特征为 调理一个选自由下列所组成之组群的功能:磷酸盐 代谢、维生素D代谢、骨骼形成以及骨骼矿物化。 20.一种单离的聚核酸,其编码一个如申请专利范 围第17至19项中任一项之多。 21.一种载体,其含有如申请专利范围第20项之聚核 酸。 22.一种寄主细胞,其系使用如申请专利范围第21项 之载体进行基因工程处理而得。 23.如申请专利范围第17至19项中任一项之多,其 进一步特征为具有一个选自由下列所组成的组群 之特征: (a)可向下调控钠依赖型磷酸盐之共同输送; (b)可向上调控肾脏25-羟基维生素D3-24-羟基; (c)可向下调控肾脏25-羟基-D-1--羟基; (d)可向上调控钠依赖型磷酸盐之共同输送; (e)可向下调控肾脏25-羟基维生素D3-24-羟基; (f)可向上调控肾脏25-羟基-D-1--羟基;及 (g)骨骼形成及矿物化。 24.一种单离抗体,其特异性结合至如申请专利范围 第17至19项中任一项之单离多。 25.一种药学组成物,其可用于治疗关于选自磷酸盐 代谢、维生素D代谢、骨骼形成及骨骼矿物化组成 的组群中之一个病症的医疗病情,该组合物包含一 个选自如下列所组成群组之治疗有效量的化合物: 如申请专利范围第17至19项中任一项之多及如申 请专利范围第20项之聚核酸。 26.一种于体外诊断一受测者之病理状况或对该病 理状况之易感性的方法,该病理状况系有关于一选 自由下列所组成群组的病症:磷酸盐代谢、维生素 D代谢、骨骼形成及骨骼矿物化,该方法包含: (a)决定如申请专利范围第20项之聚核酸是否存 在有突变;以及 (b)基于是否存在有该突变而诊断病理状况或对病 理状况的易感性。 27.一种用于治疗磷酸盐代谢病症的药学组成物,其 包含如申请专利范围第17至19项中任一项之多或 如申请专利范围第20项之聚核酸。 28.一种用于治疗血中磷酸盐过高症的药学组成物, 其包含如申请专利范围第17至19项中任一项之多 或如申请专利范围第20项之聚核酸。 29.一种用于治疗肾性骨发育不全、肾脏透析/透析 前血中磷酸盐适高症、续发性副甲状腺机能亢进 、囊性纤维性骨炎或痛风的药学组成物,其包含如 申请专利范围第17至19项中任一项之多或如申请 专利范围第20项之聚核酸。 30.一种用于治疗X联结血中磷酸盐过低性佝偻症, 带有尿中钙含量过高的遗传性血中磷酸盐过低性 佝偻症(HHRH),矿物化不足的骨病灶,青春期生长迟 滞,致癌性之血中磷酸盐过低性软骨病,肾脏磷酸 盐泄漏,肾性骨发育不全,松骨病,维生素D抗阻性佝 偻症,终端器官抗阻,肾脏梵可尼氏(Fanconi)症候群, 正常基因型佝偻症,巴吉特氏(Paget's)病,肾脏衰竭, 肾小管性酸中毒,囊性纤维症或热带口疮的药学组 成物,其包含如申请专利范围第17至19项中任一项 之多或如申请专利范围第20项之聚核酸。 31.一种用于治疗磷酸盐代谢障碍或骨骼矿物质流 失病症的组合式药学组成物,其包含如申请专利范 围第17至19项中任一项之多及锌-金属内切,而 该组合式药学组成物系供同时、分开或依序使用 。 32.一种如申请专利范围第25项之抗体或其Fab或F(ab' )2片段,其可用于诊断一个受测者的病理状况或对 该病理状况的易感性,该病理状况系有关于一选自 由下列所组成群组的病症:磷酸盐代谢、维生素D 代谢、骨骼形成及骨骼矿物化,该诊断系利用侦测 如申请专利范围第1至3项中任一项之多。 图式简单说明: 第1图:第1(a)及(b)图为得自刀豆球蛋白A管柱含有低 亲和力及高亲和力蛋白质峰之层析图。 第2图:得自刀豆球蛋白A管柱之洗提分之阳离子交 换层析图。 第3图:磷素之亲水性及疏水性之电脑预测。 第4图:磷素之抗原性之电脑预测。 第5图:磷素挠性之电脑预测。 第6图:磷素之二级结构之表面机率之电脑预测。 第7图:磷素之二级结构之电脑预测。 第8图:最大单离MEPE纯株(pHO 11.1)之完整cDNA序列(序 列识别编号:1)及胺基酸序列(序列识别编号:2)。5 个其他单离纯株涵盖于此较大纯株且全部纯株皆 系与选殖媒介pBSCPT SK II-于架构内。用于PCR的引子 被强调,残基总数分别为430及1655 bp。原核表现载 体pCal-n-EK含有来自MEPE残基V之架构内残基至MEPE中 止字码子(TAG)于1291-93bp。单一多腺化序列AA(T/U) AAA于下方画双线。与DMA-1、DSSP及OPN共享局部同源 区下方画波浪线(MEPE-要素C-端),RGD残基以椭圆体标 出,糖胺基聚糖附着位置框出(完整线格式),酪胺酸 激位置下方画单线,N糖化要素框在虚线框内。 有关包括酪蛋白激II,蛋白质激C等要素之完整 表列请参考附表1。 第9图:MEPE之GCG--结构二级结构预测。一级胺基 酸主链显示为中线,曲线指示预测转弯区。亲水/ 疏水区分别以椭圆体及菱形标示,并指示RGD要素。 N糖化位置以有柄椭圆体表示(C端),及螺旋以一 级主链之浪形区表示。 第10图:柱状图显示于不等量MEPE存在下磷酸盐的摄 取:A.92毫微克/毫升,B.300毫微克/毫升,C.500毫微克/ 毫升及D.1000毫微克/毫升。胆硷框表示使用氯化钠 替代氯化胆硷控制钠独立结果。错误管柱为SEM, MEPE与对照组之C及D间差异P値为<0.001。实验A(92毫 微克/毫升)P<0.05及实验B(300毫微克/毫升P,0.01)。A及 B之N値为4,C及D分别为5及6,使用阿诺法(Anova),接着 为纽曼库兹(Newman-Kauls)多重比较试验。 第11图:MEPE投药与磷酸盐摄取带有SEM错误管柱之剂 量曲线。 第12图:使用'slm'及lianview数学及软体工具进行序列 类似性分析(Duret,Comput. Appl. Biosci. 12(1996),507-510)。 各自运算中间隙开放处罚设定为12,间隙展开处罚 设定为4。A之比较母质为'PAM40'及BLOSUM62用于B及C( 参考Duret,Comput. Appl. Biosci. 12(1996),507-510;Huang,Comput. Appl. Biosci. 8(1992),155-165;Huang,Comput.Appl. Biosci.(1990)6 ,373-381)。类似性分数阈値于A为70%及于B及C为40%。 各幅蛋白质图显示的强调方块表示序列同源性于A 系>80%及于B及C系>62%。注意于MEPE相对于DSSP(A)中,于 DSSP有5块同源性方块>80%序列类似MEPE的单一要素( DSSESSDSGSSSES)。类似的序列同源性由DMA-1及OPN相对 于MEPE(B及C)也显然易见,MEPE为全部三种蛋白质的主 要特点。 第13图:使用安史普特(Antheprot)统计学分析对DSSP相 对于MEPE作点阵比较(Deleague,G.蛋白质分析软体: Antheroplot v2.5e微软集团公司.(7 Passage du Vercours 69- 367 Vercors Lyon Cedex 07,1997))。(A)视窗设定为13之较低 严苛性比较用于筛检参数及(B)使用较宽视窗15。 彩色指示单位母质分数。MEPE要素之C端残基具有> 80%序列同源性,要素的重复性质以条纹图样表示。 第14图:p1BL21及p6XL1重组质体含有磷素融合构成体 。Lacl:(lac启动基因;LIC:(接合依赖型选殖序列);EK: 内切激割裂位置;凝血(凝血目标序列);Amp: 安比西林(Ampicillin)抗药性;Cal(钙调理素(calmodulin )序列);磷素(磷素编码序列)。 第15图:完整磷素分子的一次结构。指示磷素之胺 基酸序列(序列识别编号:27)之结构及功能要素。 有关进一步说明请参考第8图及附表1的内容及图 说。 第16图:试管试验研究结果的柱状图显示于昆虫培 养基(全长MEPE)(Bac-1)以及缓冲液对照(CON)之完整磷 酸盐摄取,以CPM/毫微克表示。 第17图:大鼠活体试验研究结果之线图,显示尿中磷 酸盐排泄量(UP1V)随时间(1-4小时)之变化。 第18图:大鼠活体试验研究结果之线图,显示肾小球 过滤率(GFR)(单位为毫升/分钟)随时间(1-6小时)之变 化。 |
