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Un método para detectar la presencia de una secuencia de ácido nucleico diana en una muestra, comprendiendo dicho método someter dicha muestra a una reacción de amplificación en la que dicho ácido nucleico diana puede amplificarse, utilizando un conjunto de nucleótidos, al menos uno de los cuales está marcado con un primer marcaje, y un reactivo que comprende un cebador de amplificación que puede hibridar con dicha secuencia diana cuando está en forma monocatenaria, y que está conectado, mediante un grupo de engarce químico que no es reconocido por una ADN polimerasa, por su extremo 5¿ con una sonda que porta un segundo marcaje, siendo dicha sonda marcada de una secuencia que es similar a la de dicha secuencia diana, de tal modo que puede hibridar con una región complementaria en un producto de amplificación de tal modo que la energía fluorescente puede transferirse entre el primer y segundo marcajes, y en el que uno del primer o segundo marcajes comprende un marcaje donante y el otro comprende un marcaje aceptor, comprendiendo el marcaje donante una molécula fluorescente que es capaz de donar energía fluorescente al marcaje aceptor; y monitorizar la fluorescencia de dicha muestra.
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