突变型鸡Myostatin基因的检测方法在鸡育种中的应用

摘要

突变型鸡Myostatin基因的检测方法在鸡育种中的应用，它涉及鸡遗传育种改良的生物技术。该突变型鸡的Myostatin基因的核苷酸多态性为：G→A(304位)，A→G(322位)，C→T(334位)，G→A(167位)，7263A→A。本发明的育种方法按照如下步骤进行：一、PCR引物的设计，二、鸡基因组DNA的提取；三、PCR扩增；四、SSCP分析；五、对被提取基因进行分析；六、根据各基因型的特性选择种鸡。本发明是一种准确、简单、迅速、直接检测Myostatin基因单核苷酸多态性方法，利用该方法可以对种鸡进行遗传标记辅助选择育种，从而可以从根本上解决传统遗传育种中由于对肉鸡生长速度过高追求，带来的问题。

主权项

1、突变型鸡Myostatin基因的检测方法在鸡育种中的应用，其特征在于第一步：PCR引物的设计：根据本实验室克隆的鸡Myostatin基因组全序列设计了3对引物如下：P605′-TCCTATCAGGAAAACCTATC-3′P615′-ACCTCAAGGAAAATTCTGAG-3′P935′-CAACTTTCAGTAATAATGGAA-3′P945′-TGATAGGTTTTCCTGATAGGTA-3′P805′-CTAAACGTAGTAAAACAAAAGGCAGC-3′P815′-AACATTTATTTACAAAATATTGATG-3′第二步：鸡基因组DNA的提取；第三步：PCR扩增，PCR扩增反应体系为10×PCR buffer 2.5μl，10mmol/LdNTPs 2μl，20μmol/L上游引物1μl，20μmol/L下游引物1μl，Taq酶1.0U，15ng/μl DNA模板4.0μl，ddH2O 13.3μl；PCR程序为94℃ 5min 1个循环；94℃ 40s，57℃ 40s，72℃ 40s共35个循环；72℃ 8min 1个循环；4℃保温；第四步：SSCP分析，1μl PCR产物和5μl Loading buffer混合，98℃变性10min，冰浴5min，经14％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析后银染显色；第五步骤：(1)、用引物P80/P81进行PCR-SSCP分析Mostatin基因是否是以下基因型：AA ATGGATTCCTCGTGTTTGCAATGTATTTATTACGTATTBB ATAGATTCCTCGTGTTTGCAGTGTATTTATTATGTATTAB ATA/GGATTCCTCGTGTTTGCAA/GTGTATTTATTAC/TGTATT(2)、用引物P93/P94进行PCR-SSCP分析Mostatin基因是否是以下基因型：EE ATTTTGATACTAAAGGGTCCAATAGTTAFF ATTTTGATACTAGAGGGTCCAATAGTTAEF ATTTTGATACTAA/GAGGGTCCAATAGTTA(3)、用引物P80/P81进行PCR-SSCP分析Mostatin基因是否是以下基因型：CC TTGCTACAGAAATTGTTAAAAAACDD TTGCTACAGATATTGTTAAAAAACCD TTGCTACAGAA/TATTGTTAAAAAAC第六步骤：根据各基因型的以下特性选择需要的种鸡，腹脂重、腹脂率、初生重、胸肌率：AA＞AB＞BB胸肌重：EF＞FF＞EE胸肌重、胸肌率：CC＞CD＞DD。