PROCEDIMIENTO DE DETECCION DE SECUENCIAS DE ADN ESPECIFICAS DE BRUCELLA SPP MEDIANTE REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) ACOPLADA A UN ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA).

摘要

Procedimiento de detección de secuencias de ADN específicas de Brucella spp. mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) acoplada a un enzimoinmunoensayo (ELISA). Después de una amplificación selectiva de una secuencia de 223 pb de Brucella utilizando los oligonucleótidos B4 y B5, los productos amplificados resultantes marcados con digoxigenina (DIG) son hibridados con una sonda de captura biotinilada. Posteriormente, estos híbridos son capturados en placas recubiertas con estreptavidina y detectados usando un conjugado anti-DIG Fab/ peroxidasa. La técnica propuesta se ha mostrado mucho mas sensible que la PCR convencional y que los métodos bacteriológicos y mas específica que los métodos serológicos habituales, permitiendo su utilización para la puesta en práctica de un procedimiento fácil y rápido de diagnóstico molecular de la infección por Brucella spp. en muestras de sangre humana y en otras muestras clínicas, la monitorización de la respuesta al tratamiento y la detección precoz de las recidivas evitando el riesgo de manipulación del germen.