重组鸭白介素2蛋白的制备方法及其用途

摘要

本发明公开了一种重组鸭白介素2蛋白制备方法及其用途。RT-PCR扩增的不同品种鸭的鸭白介素-2cDNA片段与原核表达载体pBAD/his B载体和真核表达载体pMETαA构建高效表达质粒，重组表达载体分别转化大肠杆菌LMG194和酵母菌株PMAD11和PMAD16后诱导表达。大肠杆菌诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即可得到鸭白介素-2粗制品，用蛋白纯化系统得到鸭白介素2纯品。鸭白介素-2粗制品或纯品加保护剂后可以作为免疫佐剂、抗病添加剂和疾病治疗药物。鸭白介素-2单克隆抗体和多克隆抗体的制备过程简单经济，可以作为良好的免疫抑制剂。本发明应用基因工程技术制备的重组鸭白介素-2蛋白，具有工艺流程简单，生产成本低，稳定性好，生物学活性高等特点。

主权项

1.一种重组鸭白介素2制备方法，其特征在于它的步骤如下：1)分别自中国的绍兴麻鸭和外来品种美洲鸭的脾淋巴细胞中克隆出SEQ IDNO：1，3所示序列的鸭白介素-2的cDNAs与含有PBAD启动子的原核表达载体pBAD/his B组建成高效表达载体pBAD/His B/dkIL-2；或者该cDNAs与含有PAUG1启动子的真核表达载体pMETαA组建成高效表达载体pMETαA/dkIL-2；2)重组载体pBAD/His B/dkIL-2转化大肠杆菌LMG194，用RM作为基础培养基，通过发酵扩增大肠杆菌工程菌LMG194；或3)重组载体pMETαA/dkIL-2分别转化酵母菌PMAD11和PMAD16，用BMDY作为基础培养基，通过发酵扩增酵母工程菌PMAD11和PMAD16，在表达不同时间加氮源、碳源营养素；4)大肠杆菌工程菌LMG194用阿拉伯糖诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即可得到鸭白介素-2粗制品，酵母工程菌PMAD11和PMAD16用甲醇诱导表达后，表达的鸭白介素-2主要以分泌形式存在于BMDY培养基中，经过离心取上清即可得到鸭白介素-2粗制品；用Ni-NTA Argarose蛋白纯化系统可得到鸭白介素-2纯品；5)制备的重组鸭白介素-2纯品或粗制品加入稳定剂和助溶剂后，将无菌过滤、分装和冻干后制成的成品，保存于-20℃的冷藏环境中。