发明名称 影响释放肿瘤坏死因子受体的酵素活性之因子
摘要 细胞激素TNF的生物作用系由与细胞表面上的TN F受体结合所介导。本发明提供促进酵素裂解及使TNF受体自细胞释放出来的新颖化合物,因而影响讯息传导。本发明亦提供影响TNF受体释放的蛋白质,以及编码该蛋白质的多核酸序列。在一种医药组成物中,可施用这些产物以使TNF的传导正常化,藉以减缓一疾病的症状。本发明也叙述得到促进或抑制TNF受体释放的其他组成物之方法。
申请公布号 TWI244501 申请公布日期 2005.12.01
申请号 TW088107897 申请日期 1999.05.14
申请人 雷根斯加卅大学 发明人 哲也泻永;盖尔A. 戈朗格
分类号 C12N15/12;C07K14/47 主分类号 C12N15/12
代理机构 代理人 林镒珠 台北市中山区长安东路2段112号9楼
主权项 1.一种选自序列编号1至3、5、6及8至10之分离的多 核酸。 2.一种分离的多核酸,其含有至少500个连续之序 列编号1至3、5、6及8至10中任一者之核酸。 3.一种分离的多核酸,其含有至少30个连续之序 列编号1至10中任一者之核酸,不完全包含在基因 库编号(GenBank Accession No.)AJ003355、AA806165、AI002979 、HSCT33896、U52522、AA779203、C06247、AA707194、AA599596 、5453538、U13369、X53793、M11167或J03528中。 4.一种分离的多核酸,其编码至少30个连续之由 序列编号1至10中任一者所编码的胺基酸,但不包含 在基因库编号(GenBank Accession No.)AJ003355、AA806165、 AI002979、HSCT33896、U52522、AA779203、C06247、AA707194、 AA599596、5453538、U13369、X53793、M11167或J03528中。 5.一种分离的多核酸,其可以在严格的条件下与 申请专利范围第1至4项中任一项的多核酸杂交 。 6.根据申请专利范围第1至5项中任一项之分离的多 核酸,其中在能表现TNF受体的细胞中,该多核 酸的表现会造成受体自细胞释放。 7.根据申请专利范围第1至5项中任一项的多核酸 ,当以表现TNF受体的COS-1细胞培养时,其编码一种促 进酵素裂解及受体释放之多。 8.根据申请专利范围第1至5项中任一项的多核酸 ,其编码一种对于增进酵素裂解及TNF受体自人类单 核白血球表面释放的蛋白质具免疫原性之多。 9.一种标记的探针或扩增的引子,其可专一性地监 定一含有序列编号1至3、5、6及8至10中任一者的多 核酸。 10.一种反意义多核酸或核糖,其包含序列编号 1至3、5、6及8至10任一者中至少10个连续核酸,其 抑制TRRE活性的调控剂之表现。 11.一种分离的多,其包含根据申请专利范围第1 至8项中任一项的多核酸所编码之至少10个连续 胺基酸残基。 12.一种分离的多,其包含序列编号1至3、5、6及8 至10任一者所编码之至少10个连续胺基酸残基。 13.一种分离的多,其包含序列编号147至149、151或 153-154任一者所编码之至少10个连续胺基酸残基。 14.根据申请专利范围第11至13项中任一项的多, 当以表现TNF受体的COS-1细胞培养时,其促进酵素裂 解及受体释放。 15.根据申请专利范围第11至13项中任一项的多, 其对于增进酵素裂解及TNF受体自人类单核白血球 表面释放的蛋白质具免疫原性。 16.根据申请专利范围第11至13项中任一项的多, 其缺乏一跨膜序列。 17.根据申请专利范围第11至13项中任一项的多, 其系藉由一种方法所产生,该方法包括在一宿主细 胞中重组表现且接着由培养该细胞的培养基中纯 化该多。 18.一种制造申请专利范围第11至17项中任一项的多 之方法,其包含: a)将基因改良以表现根据申请专利范围第1至8项中 任一项的多核酸之宿主细胞培养;且接着 b)由该等细胞中纯化该多。 19.根据申请专利范围第18项之方法,其包含收集培 养基,且藉由包括亲和性色层分析之方法自培养基 中纯化该多。 20.一种对申请专利范围第11至17项中任一项的多 具有专一性之分离的抗体。 21.一种制造申请专利范围第20项的抗体之方法,其 包含使一哺乳动物免疫化或使免疫胜任细胞或颗 粒接触根据申请专利范围第11至17项中任一项之多 。 22.一种测定细胞或组织样品中改变的TRRE活性之分 析方法,其包含: a)将该样品与一根据申请专利范围第1至9项中任一 项的多核酸接触,其系在使得该多核酸专一性 地与编码TRRE活性调控子(若存在于该样品中时)的 核酸杂交之状况下进行;以及 b)测定已杂交的多核酸之结果,以作为在该样品 中改变的TRRE活性之测量。 23.一种测定细胞或组织样品中改变的TRRE活性之分 析方法,其包含: a)将该样品与一多核酸接触,其系在使得该多核 酸专一性地与编码TRRE活性调控子(若存在于该 样品中时)的核酸杂交之状况下进行;以及 b)测定已杂交的多核酸之结果,以作为在该样品 中改变的TRRE活性之测量; 其中该多核酸含有包括于序列编号1-10中任一者 的至少30个连续核酸之序列。 24.一种测定细胞或组织样品中TRRE活性调控子的改 变表现之分析方法,其包含: a)将该样品与申请专利范围第20项的抗体接触,其 在使得该抗体与调控子(若存在于该样品中时)结 合之状况下,藉以形成抗体一抗原复合物;以及 b)测定任何形成的复合物,以作为该调控子的改变 表现之测量。 25.一种分析个体中与改变的TRRE活性相关的疾病状 况之方法,其包含以根据申请专利范围第22或23项 的方法测定来自该个体的样品中改变的TRRE活性, 或以根据申请专利范围第24项的方法测定TRRE调控 子的改变之表现,以及接着使改变的程度与疾病状 况关联化。 26.一种减少由细胞激素讯息传导至细胞之方法,其 包含将该细胞与一根据申请专利范围第1至10项中 任一项多核酸接触。 27.一种减少由细胞激素讯息传导至细胞之方法,其 包含将该细胞与一包含序列编号1-10中任一者的至 少30个连续核酸的多核酸接触。 28.一种减少由细胞激素讯息传导至细胞之方法,其 包含将该细胞与一申请专利范围第11至17项中任一 项的多接触。 29.一种减少由细胞激素讯息传导至细胞之方法,其 包含将该细胞与一包含于序列编号1-10中任一者的 至少10个连续胺基酸的多接触。 30.一种增加由细胞激素讯息传导至细胞之方法,其 包含将该细胞与根据申请专利范围第1至10项中任 一项的多核酸接触,或将细胞与根据申请专利范 围第20项的抗体接触。 31.根据申请专利范围第26至30项中任一项之方法, 其中该细胞激素为TNF。 32.一种筛选具调控TRRE活性能力的多核酸之方法 ,其包含: a)提供表现TRRE及TNF-受体两者的细胞; b)以欲筛选的多核酸使该等细胞基因改变; c)将基因改变的细胞进行选殖;以及 d)监定以一改变速率经酵素释放该受体之选殖株 。 33.一种筛选具影响TRRE活性能力的物质之方法,其 包含: a)在该物质存在下,以一申请专利范围第11至17项中 任一项的多培养TNF受体或表现TNF受体的细胞; b)测量任何裂解出来的TNF受体;以及 c)将由该多所释放受体之增加或减少与该物质 增加或减少TRRE活性之能力关联化。 34.一种筛选具影响TRRE活性能力的物质之方法,其 包含: a)在该物质存在下,以一多培养TNF受体或表现TNF 受体的细胞; b)测量任何裂解出来的TNF受体;以及 c)将由该多所释放受体之增加或减少与该物质 增加或减少TRRE活性之能力关联化; 其中该多具有由序列编号1-10中任一者所编码之 至少10个连续胺基酸。 图式简单说明: 图1系为一种质体pCDTR2的代表图解。此质体表现p75 TNF-R,即TNF受体的~75kDa形式。PCMV代表细胞巨大病 毒;BGHpA代表牛生长激素多腺化讯息。 图2系为一种描述基因上改变以表现此受体的COS-1 上侦测到的p75 TNF-R的含量之线条图。得自转形细 胞,称为C75R( ,上升而猝然下降线)之结果系与得自 亲代的COS-1细胞( ,基线)之结果相比较。受体的数 目是由Scatchard分析(inset)来计算。 图3系为一种存活图,显示于注射脂多醣类(LPS)以诱 导败血性腹膜炎的老鼠中TRRE会降低死亡率。( )仅 有LPS;( )LPS及对照组缓冲液;( )LPS及TRRE(2,000U);( )LPS 及TRRE(4,000U)。 图4系为一条状图的一半程度再现,显示9个新的选 殖株对CR75细胞(被转染以表现TNF受体的COS-1)上TRRE 活性之影响。 图5系为存活图,显示4个新的蛋白质表现拯救受到 注射LPS抗原的老鼠之能力。( )盐水;( )BSA;()Mey-3( 100微克);()Mey-3(10微克);(*)Mey-5(10微克);( )Mey-8(10微 克)。
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