水稻稻瘟菌DNA指纹图谱带型编码程式分类分析方法

摘要

本发明涉及一种水稻病菌变异性的研究分析方法，属于农业科学技术领域。本发明的方法通过采集病株，分离单孢菌株，基因组DNA提取，rep－PCR扩增，电泳形成指纹图谱，根据指纹图谱得出编码程式，不仅可以借助分子遗传学技术实现对水稻病菌变异的快速监测，并且由于提出了切实可行的相应编码程式，因此易于解读，便于异地研究结果相互比对，使有关研究成果得以标准化，从而解决了本领域的一大技术难题，与现有技术相比，取得了显著的实质性进步。

主权项

1.一种水稻病菌DNA指纹图谱带型编码程式分类分析方法，其特征在于包括以下基本步骤：1)、采样——采集病株，分离单孢菌株；2)、基因组DNA提取2、1)提取菌丝——单孢菌株在产孢培养基上培养产孢后，洗取孢子至液体培养基中培养，再冻干或在干燥器中抽干菌丝；2、2)提取DNA——将菌丝研磨成粉，先后加入提取液、SDS、NaCl、CTA、氯仿:异戊醇，异丙醇，每次加入均需充分混匀，低温沉淀DNA；3)、rep-PCR扩增——加入前后引物，使两端核苷酸序列进行反向扩增；4)、电泳形成指纹图谱——将以上PCR产物放入琼脂糖凝胶电泳，形成指纹图谱；5)、根据指纹图谱得出编码程式5、1)确定主带——将出现频率较高的扩增带定义为主带，并以此为参照带确定其它条带的位置；5、2)主带编码——以大写字母顺序按分子量由小到大排列主带的代号，所缺主带分别用小写字母表示；5、3)形成主带程式——程式的第一部分表示主带数目；5、4)形成副带程式——程式的第二部分为主带之间的扩增带，即副带，用小写字母表示，以相邻两主带之间距离中线划分，比中线分子量小的带编码为前一分子量主带的符号，符号前面加上负号；比中线分子量大的带编码为后一分子量主带的符号，前面加上正号；5、5)形成编码程式——将主带程式与副带程式合并。