一种基于芯片的反义寡核苷酸筛选方法及其用途

摘要

本发明涉及一种生物工程类检测技术及其用途。具体说是将合成并修饰的靶向特定基因的寡核苷酸固定于化学修饰的固相载体上制备成基因芯片，与放射性同位素或非放射性分子标记的信使核糖核酸(mRNA)模板杂交，杂交结束后洗去杂交液并晾干，加入RNase H切割，对照区只加缓冲液不加酶，一定时间后洗涤、晾干并进行检测，分析各序列结合强度及RNase H切割活性，以RNase H切割前/切割后的比值进行排序，理论上比值越大的序列其结合活性和RNase H切割活性越好，优化出具有RNase H激活活性的结合靶点序列、最佳寡核苷酸长度及其修饰方法。从上述优化的序列中选出最佳寡核苷酸序列，(1)通过体内外活性评价进一步确定其生物活性，获得寡核苷酸候选药物；(2)作为疾病诊断的探针；(3)作为基因功能研究的工具。

主权项

1.一种基于芯片杂交和原位RNase H切割的反义寡核苷酸筛选方法，其特征在于，通过将合成并修饰的靶向特定基因的寡核苷酸探针固定于化学修饰的固相载体上制备成基因芯片，与放射性同位素或非放射性分子标记的信使核糖核酸模板进行杂交，杂交结束后洗去杂交液并晾干，加入RNase H进行切割，对照区只加缓冲液不加酶，一定时间后洗涤、晾干并进行信号检测扫描，分析各序列结合靶mRNA强度及RNase H切割活性，以RNase H切割前/切割后的比值进行排序，根据比值获得具有RNase H激活活性的反义寡核苷酸。