| 主权项 |
1.一种低聚核酸,其为使用于切断、检测或增幅 结核菌之基因要素的pab基因或来自该基因之RNA时 的低聚核酸,其特征为可与pab基因或来自该基因 之RNA作特异性键结,如序列号码1至20所示之任一个 序列所形成之低聚核酸或与这些低聚核酸成 互补之低聚核酸。 2.如申请专利范围第1项之低聚核酸,其中该低聚 核酸为欲进行DNA延长反应之低聚核酸引子。 3.如申请专利范围第1项之低聚核酸,其中该低聚 核酸为,其一部份被修饰或经可检测的标识物质 作标识之低聚核酸探针。 4.如申请专利范围第1项之低聚核酸,其中该低聚 核酸为,未损害作为低聚核酸探针的机能之范 围内,变换其部份硷基,而成为合成低聚核酸。 5.一种结核菌之pab基因增幅步骤,其特征为利用以 来自试样中存在之结核菌基因要素之pab基因之RNA 之特定序列为模板,使用具有与该特定序列相同序 列之第1引子,以及具有与该特定序列成互补序列 之第2引子,藉由RNA依赖DNA聚合(RNA-dependent DNA polymerase)合成cDNA,以核糖核酸H分解RNA-DNA双股之 RNA而生成单股之DNA,以该单股之DNA为模板,藉由DNA 依赖DNA聚合(DNA-dependent DNA polymerase)生成具有可 转录该特定序列或与该特定序列成互补序列所形 成之RNA的启动子序列之双股DNA,然后该双股DNA于RNA 聚合的存在下,生成RNA转录产物,接着该RNA转录 产物成为该反转录酵素合成cDNA之模板之RNA增幅步 骤的检测法中,使用如序列号码28至33所示之任一 个序列所形成,具有与欲增幅之结核菌之pab基因的 RNA序列一部份相同之序列的第1引子,以及如序列 号码34至41所示之任一个序列所形成的具有与欲增 幅之结核菌之pab基因的RNA序列一部份成互补序列 之第2引子,其中第1引子或第2引子之任一引子为5 ′侧上具有附加RNA聚合的启动子序列之序列。 6.如申请专利范围第5项之增幅步骤,其中该第1引 子为序列号码33所示序列所成、且该第2引子为序 列号码40所示序列所成、或该第1引子为序列号码 30所示序列所成、且该第2引子为序列号码37所示 序列所成、或该第1引子为序列号码30所示序列所 成、且该第2引子为序列号码35所示序列所成。 7.如申请专利范围第5项之增幅步骤,其中关于该RNA 增幅步骤,可藉由与增幅所生成之RNA转录产物作特 异性键结,且于以嵌合性萤光色素所标识之低聚核 酸之存在下实施,测定反应液之萤光特性之变化 而成但该经标识之低聚核酸系与该第1及第2引 子相异之序列)。 8.如申请专利范围第7项之增幅步骤,其中该经标识 之低聚核酸为设计成与RNA转录产物的至少一部 份序列成互补键结,与不形成复合体时相比较,其 萤光特性会产生变化者。 9.如申请专利范围第8项之增幅步骤,其中该经标识 之低聚核酸系由序列号码42至44所表示之任一个 序列中之至少连续10个硷基所形成之序列,或为其 互补序列。 图式简单说明: 图1是使用MP-1至MP-20R之低聚核酸,在41℃下进行 与结核菌pab基因之标准RNA之结合试验后,试样之尿 素变性6%聚丙烯醯胺电泳照片(黑白相反)。箭头方 向是指特异条带(band)的位置。第1至第20行分别为 使用MP-1至MP-20R进行结合试验时之结果,N行为Nega( 使用稀释液以取代低聚核酸)。另外,使用RNA Maker(0.1至1kb及0.2至10kb)为分子量标志(M1行,M2行)。 图2为关于实施例2中,使用如表2之组成(a)至(m)之低 聚核酸,进行RNA之增幅反应时之电泳照片。图中 表示,P为初期RNA量103复制/试验为RNA试样,N为阴性 对照(使用稀释液以取代RNA试样)。使用X174/ HaeIIIdigest(Maker 4)为分子量标志(M行)。 图3为关于实施例3中所进行之初期RNA量101复制/试 验至RNA量105复制/试验,随反应时间与RNA之生成萤 光增加比也增大之图(A),以及初期RNA量之对数値及 完成时间之间所得到之检量线(B)。初期复制数102 复制/试验之RNA,约15分钟可检测,表示初期RNA量及 完成时间之间之相关关系。 |
