Sa抗原的纯化方法

摘要

本发明涉及Sa抗原的纯化方法，是在Despres布氏漏斗法提取Sa粗抗原的基础上，采用CNBr－Sepharose 4B与抗Sa IgG偶联制成亲和层析柱，对Sa粗抗原进一步纯化，得到纯度更高的Sa抗原。经10％SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，显示本发明纯化的Sa抗原电泳条带明显减少，免疫印迹法检测也发现抗Sa抗体的显色条带清晰易辨。

主权项

1、一种Sa抗原的纯化方法，是采用亲和层析法对提取的Sa粗抗原进一步纯化，以得到纯化的Sa抗原，其特征是包括以下步骤：a)纯化抗Sa抗体在缓冲液B中将Protein G Sepharose 4 Fast Flow浸泡脱气，装柱，缓冲液B平衡；取RA患者血清，离心、0.22μm滤膜过滤、缓冲液B透析，得到抗Sa阳性血清；将抗Sa阳性血清上柱孵育30分钟，先用缓冲液B洗柱，再用洗脱液A洗脱，洗脱液收集到预置中和缓冲液的收集管中，透析后得到抗SaIgG；b)制备亲和层析柱取活化的CNBr-Sepharose 4B，在偶联缓冲液中与纯化的抗Sa IgG混合，4℃摇荡过夜，偶联缓冲液淋洗后移入阻断缓冲液中，室温孵育2小时，制成亲和介质；制成的亲和介质用偶联缓冲液和醋酸盐缓冲液交替淋洗后，在缓冲液C中浸泡脱气，装柱，缓冲液C平衡，制成亲和层析柱；c)Sa抗原的亲和层析取Sa粗抗原，在亲和层析柱上循环上样5小时，缓冲液C洗柱，洗脱液B洗脱，洗脱液收集到预置中和缓冲液的收集管中，透析后得到纯化的Sa抗原。