金标记免疫吸附法检测转Bt基因抗虫棉

摘要

一种金标记免疫吸附法检测转Bt基因抗虫棉属于转Bt基因抗虫棉的检测方法。本方法是以硝酸纤维素膜为固相载体，将待测样品固定在硝酸纤维素膜上，用兔抗Bt毒蛋白抗体与膜上的Bt毒蛋白特异性反应，其特点是再用生物素标记的羊抗兔抗体与膜上的Bt毒蛋白特异性反应，最后再利用胶体金标记的链霉亲和素蛋白与标记羊抗兔抗体的生物素分子之间的高度亲和反应显示结果。因此，本方法具有灵敏度高，特异性强，操作简单，无需特殊设备，判断直观，非常适合对大量样品的检测。

主权项

一种金标记免疫吸附法检测转Bt基因抗虫棉的方法，是以硝酸纤维素膜为固体载体，将待测样品固定在硝酸纤维素膜上，用兔抗Bt毒蛋白抗体与样品中固定在硝酸纤维素膜上的Bt毒蛋白发生特异性亲和反应，之后，再用生物素标记的羊抗兔抗体之抗体与兔抗Bt毒蛋白抗体进一步发生特异反应，最后，利用胶体金标记的链霉亲和素蛋白与羊抗兔抗体上所标记的生物素分子之间的高度特异的亲和反应，显示检测结果，其特征在于：利用生物素标记的羊抗兔抗体之抗体与兔抗Bt毒蛋白抗体之间以及胶体金标记的链霉亲和素蛋白与羊抗兔抗体上所标记的生物素分子之间的高度特异的亲和反应，将被检测分子的信号通过逐级放大，最终根据胶体金特有的红色斑点的有无和颜色的深浅判断结果；待测样品制备是，称取新鲜的叶片或吸涨的种子，按1∶5(W/V)比例加入10mM PH9.5的碳酸盐缓冲液，研磨成匀浆，10000rpm离心15分钟，取上清液，加等体积的低碳醇有机熔剂，充分混合，离心同上，取下层清液备用。