偶联酶促反应测定5'－核苷酸酶的方法和试剂盒

摘要

Bertrand(1982)借助5’－核苷酸酶将次黄苷酸水解产生次黄苷，通过次黄苷偶联嘌呤核苷磷酸化酶和黄嘌呤氧化酶酶促反应生成过氧化氢，利用Trinder氏反应过氧化氢在过氧化物酶的氧化作用下将供氢体3，5－双氯－2－羟基苯磺酸和4－氨基比林偶联物凝聚成紫红色的有色醌，通过连续反应和动态观察有色醌510nm处吸光度上升的速率来测定5’－核苷酸酶的活性。该法缺点是供氢体的选择过窄。本发明将苯胺类化合物ADOS、ADPS、ALPS、TODB、TOOS和TOPS用作Trinder氏反应的供氢体，增加了反应的灵活性。本发明还涉及用于进行上述方法的试剂盒。

主权项

1.一种测定生物样本中5’-核苷酸酶活性的方法，其特征是借助5’-核苷酸酶将次黄苷酸水解产生次黄苷，通过次黄苷偶联嘌呤核苷磷酸化酶和黄嘌呤氧化酶酶促反应生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下使苯胺类供氢体和4-氨基安替比林偶联物凝聚成有色产物，通过连续反应和动态观察有色产物的产量，从而测定5’-核苷酸酶的活性。