一种制备小干涉RNA分子的方法

摘要

本发明公开了一种制备小干涉RNA分子的方法。它包括以下步骤：1)分别合成小干涉RNA分子的正义链和反义链的DNA模板及通用杂交寡核苷酸；所述DNA模板的有义链自5′到3′方向依次包括启动子序列、不含有碱基T的引导序列、与该引导序列紧密相连的靶序列和与该靶序列紧密相连的3′末端的两个碱基TT；所述通用杂交寡核苷酸为与所述引导序列互补的单链寡核苷酸；2)分别用RNA聚合酶转录出一端带有所述引导序列的正义链RNA和反义链RNA；3)将正义链RNA和反义链RNA等摩尔比混合，并退火得到两端带有所述引导序列的双链RNA；4)以与所述双链RNA 2∶1的摩尔比加入通用杂交寡核苷酸，得到DNA－RNA杂合分子；用RNase H切除所述杂合分子中带有的引导序列，得到小干涉RNA分子。

主权项

1、一种制备小干涉RNA分子的方法，包括以下步骤：1)分别合成小干涉RNA分子的正义链和反义链的DNA模板及通用杂交寡核苷酸；所述小干涉RNA分子的正义链和反义链的DNA模板均为互补的双链；所述DNA模板的有义链自5′到3′方向依次包括启动子序列、不含有碱基T的引导序列、与该引导序列紧密相连的靶序列和与该靶序列紧密相连的3′末端的两个碱基TT；所述通用杂交寡核苷酸为与所述引导序列互补的单链寡核苷酸；2)分别用RNA聚合酶将步骤1)中合成的小干涉RNA分子的正义链和反义链的DNA模板转录出一端带有步骤1)所述DNA模板的有义链中的引导序列的正义链RNA和反义链RNA；3)将带有步骤1)所述DNA模板的有义链中的引导序列的正义链RNA和反义链RNA等摩尔比混合，并退火得到两端带有步骤1)所述DNA模板的有义链中的引导序列的双链RNA；4)以与步骤3)中所述双链RNA 2∶1的摩尔比加入所述通用杂交寡核苷酸，反应形成DNA-RNA杂合分子；用RNase H切除所述DNA-RNA杂合分子中带有的步骤1)所述DNA模板的有义链中的引导序列，得到小干涉RNA分子。