人卵巢癌耐药细胞株及其培养方法

摘要

本发明涉及一种人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TAX或拓扑替康耐药细胞株SKOV3/TOP及其培养方法，其特征是选择人卵巢癌细胞株SKOV3作为亲代细胞，选用TAX的终浓度为300ug/ml或TOP的终浓度为2160ng/ml作为大剂量冲击用量，以反复大剂量冲击方式间歇用药，建立SKOV3/TAX细胞耐药指数(RI)为10.57，除对TAX耐药外，对5－氟尿嘧啶有明显的交叉耐药，SKOV3/TO P细胞耐药指数(RI)为10.67，除对TOP耐药外，对米托蒽醌(MX)、喜树碱(CPT)、长春新碱(VCR)有明显的交叉耐药，与敏感细胞相比P＜0.01。

主权项

1、一种人卵巢癌耐药细胞株培养方法，其特征在于：(1)药物：拓扑替康(TOP)或紫杉醇(TAX)；(2)用药剂量：采用TAX的终浓度为300ug/ml或TOP的终浓度为2160ng/ml作为大剂量冲击用量；(3)亲代细胞培养：人卵巢上皮癌细胞株SKOV3细胞生长于含15％小牛血清的RPMI1640培养基中，置入5％CO2、37℃培养箱中培养；(4)卵巢癌耐药细胞株诱导：取对数生长期细胞，0.25％的胰酶消化后计数，以5×105/ml细胞接种于培养瓶(以每瓶5ml接种)，24小时后细胞贴壁，再加入终浓度为300ug/ml的TAX或终浓度为2160ng/ml的TOP作用2小时，弃去培养液，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗3遍，更换新鲜培养液，待细胞恢复生长再进行第二次冲击，如此反复作用，TAX共加药冲击12次或TOP共加药冲击13次，历时10个月建成人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/TAX、或SKOV3/TOP。