主权项 |
1、一种柠檬马鞭草的组织培养快速繁殖方法,其特征在于包括如下步骤:1)外植体灭菌:选取柠檬马鞭草主干基部幼嫩枝条,去除叶片,放在洗洁精水中浸洗,经自来水冲洗后放入70%的酒精中搅拌15~20秒,取出立即转入含吐温-80的饱和漂白精溶液中浸泡9~10分钟,其间不断用软毛刷刷拭腋芽部位,取出用无菌水冲洗3~4次后用灭菌吸水纸将水吸干,继而切取邻近顶芽的幼嫩含节茎段作外植体,迅速接种在MS培养基上,放入暗处培养,第二天将材料转接到新的MS培养基上;2)腋芽诱导:将在MS培养基上不再褐化的外植体转入诱导培养基MS+6-BA0.5~1.0mg/L+NAA0.1mg/L+琼脂7.0g/L+蔗糖30g/L,pH5.8,培养温度为25±2℃、光照周期12h.d-1、光强度为1200lux;3)腋芽增殖:切取诱导培养中单个芽,去除2/3叶片,切取含节的茎段接种到增殖培养基MS+6-BA0.25~0.5mg/L+NAA0.1mg/L+琼脂7.0g/L+蔗糖30g/L,pH5.8,培养温度为25±2℃,光照周期14h.d-1,光强度为2000lux;4)生根诱导:剪取增殖培养中长度为1.5~2.0cm的健壮的芽接种到生根培养基1/2MS+IBA0.5mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖25g/L,pH5.8,培养温度为20±2℃、光照周期10h.d-1、光强度为1000lux;5)炼苗移栽:选择根长2~5cm、苗高3~5cm的小苗,加无菌水炼苗5-7天,然后洗掉根部琼脂培养基,移栽于装有高温灭菌过的蛭石和腐殖质土比例为1∶1的苗床上,浇足水,上罩以薄膜,在温室内继续培养,湿度控制在70%,温度20±2℃,光照周期10h.d-1,光照强度1000lux,逐渐恢复自然状态下温湿度,一个月后移入大田。 |