与基因沉默相关的方法和组合物

摘要

一种通过在特定条件下酶促剪切双链大RNA来获得用于基因沉默的不均一短双链RNA分子(hsiRNA)的混合物的方法。所得到的混合物不需任何分级分离步骤便总能包含有更多的大小为21－22个核苷酸的片断。这些片断包含的序列集合起来便总体上覆盖了作为这些片断来源的整个长度的大双链RNA分子。具有可以单独地代表目标mRNA的片断的序列的双链RNA可以用这里描述的方法来分析，以鉴定可以对某基因或转录序列产生基因沉默效应的最具活性的一部分hsiRNA片段或者单独的siRNA片断。另外提供了制备和克隆编码所选的siRNA、hsiRNA混合物或者发夹序列的DNA的方法，从而提供了源自长双链RNA的基因沉默试剂的源源不断的供应。

主权项

1.一种生成hsiRNA混合物的方法，包括：(a)在含有二价过渡金属离子和RNaseIII的反应混合物中消化大双链RNA制备物；以及(b)生成hsiRNA混合物。