一种通用引物联合标记法

摘要

本发明公开了一种通用引物联合标记法，该方法设计了一种与病毒、细菌和人类基因同源性较低的通用引物U和随机通用引物UNN，通过优化的两轮扩增可以同时对各种微量的单链或双链DNA样品进行大量扩增标记并用于临床检测型芯片的杂交，从而能检测多种微量的临床样品。与常用的样品标记方法比较，本发明是一种高效、灵敏的荧光标记方法。

主权项

1、一种通用引物联合标记法，包括以下步骤：1)用oligo6.0设计通用引物U和随机通用引物UNN，其中所述通用引物U为CTATACTGAGTCGTTGATC，所述随机通用引物UNN为CTATACTGAGTCGTTGATCNN，N代表G、A、T、C；2)对于RNA样品，先用随机通用引物UNN在逆转录酶的作用下逆转录合成cDNA第一链，然后再用于下面的两轮扩增标记，对于DNA单链或双链样品，可以直接用于下面的两轮扩增标记；3)样品的第一轮扩增：用随机通用引物UNN对DNA单链或双链样品在Taq酶的作用下进行两个循环的扩增，产生两端带有通用引物U的互补序列的DNA片段；4)样品的第二轮扩增：第一轮扩增样品可通过下述两种荧光标记方法进行第二轮扩增标记：a)用cy3-U或cy5-U扩增标记第一轮的扩增产物，得到用于杂交的荧光标记样品；b)用通用引物U对第一轮扩增产物进行扩增的过程中掺入荧光标记的dUTP或dCTP，得到用于杂交的荧光标记样品。