三唑磷人工半抗原、抗原、抗体的制备方法

摘要

本发明是关于三唑磷人工半抗原、人工抗原和特异性抗体的制备方法，属于农药免疫化学技术领域。以O－乙基硫代磷酰二氯为原料，与三唑磷的合成中间体1－苯基－1，2，4－三唑醇在催化剂作用下反应生成一氯物，一氯物与氨基丁酸在缚酸剂的作用下反应生成三唑磷半抗原TZLBu，一氯物与氨基己酸在缚酸剂的作用下反应生成TZLHe；以次为原料，然后通过碳二亚胺法和混合酸酐法与蛋白质分别偶联制备人工抗原。将人工抗原免疫动物后产生对三唑磷高亲合力的特异性抗体。这种抗体与其他化合物不易发生交叉反应。用该抗体建立的酶联免疫吸附分析法可用于快速、灵敏、方便、廉价地检测样本中痕量的三唑磷残留。

主权项

1、一种三唑磷人工半抗原的合成方法，其特征在于依次包括下列步骤：1)O-乙基硫代磷酰二氯的合成：三氯硫磷与无水乙醇，采用先滴加后反应的步骤反应1～10小时，所述三氯硫磷与无水乙醇的克分子比为1∶1～10，滴加温度为-30～0℃，反应温度为-20～15℃；2)O-乙基-O-[3-(1-苯基-1，2，4-三唑基)]硫代磷酰一氯的合成：将O-乙基硫代磷酰二氯与1-苯基-1，2，4-三唑醇在极性溶剂、缚酸剂存在下反应，投料比O-乙基硫代磷酰二氯∶1-苯基-1，2，4-三唑醇＝1∶0.5～1∶3(克分子比)，反应温度为-20～30℃，反应时间为0.5～3.0小时；3)三唑磷半抗原(n+1)-[O-乙基-O-[3-(1-苯基-1，2，4-三唑基)]硫代磷酰胺基]-(n+1)酸的合成：将(n+1)-氨基酸溶解于碱性溶液中，搅拌下缓慢加入溶解于极性溶剂的O-乙基-O-[3-(1-苯基-1，2，4-三唑基)]硫代磷酰-氯溶液，再滴加氢氧化钠水溶液进行反应，(n+1)-氨基酸与O-乙基-O-[3-(1-苯基-1，2，4-三唑基)]硫代磷酰一氯的克分子比为1∶0.5～6，反应温度为-10～40℃，反应时间为1～5小时。