哺乳细胞串联亲和纯化载体及其纯化蛋白复合物的方法

摘要

本发明属于蛋白分离纯化领域。本发明提供了一种用于哺乳细胞的串联亲和纯化载体，其制备方法及其纯化蛋白复合物的方法。串联亲合纯化(TAP)用于分离蛋白复合物，研究生理条件下蛋白－蛋白相互作用。本发明的串联亲合纯化载体适于研究高等哺乳细胞中蛋白质相互作用，用两个Flag标签序列取代了最初TAP载体上蛋白A标签序列，使得标签分子量大大减小，有利于外源目的基因与TAP载体有效融合表达，减小标签对融合蛋白的功能或稳定性的影响；同时双重Flag标签序列有利于与抗Flag的单克隆抗体发生高亲和力结合。因此，本发明的TAP载体用于分离纯化高等哺乳细胞中的蛋白复合物，将更为高效和简便。

主权项

1.一种哺乳细胞串联亲和纯化载体，其特征在于，在该载体多克隆位点上游含有Flag标签和钙调素结合肽序列，并且在Flag标签和钙调素结合肽序列之间有烟草蚀纹病毒蛋白酶酶切位点。