用新的复性方法制备重组人神经生长因子

摘要

一种通过二硫键异构酶(PDI)催化复性制备重组人神经生长因子(rhNGF)的方法，包括步骤①通过工程菌大肠杆菌表达rhNGF，②进行菌体破碎，③通过离心分离包含体，④利用变性体系变性溶解，变性体系含有1-10M尿素，5-50mM Tris，1-5mM EDTA，且pH 7-10；⑤PDI催化复性，rhNGF与PDI的摩尔比为100∶1-10∶1；⑥脱盐以及⑦阳离子交换层析，采用CM-Sepharose阳离子交换柱，洗脱条件为0-1M NaCl，pH4-8。经上述步骤，即可制备得到纯度大于95％，具天然生物学活性的rhNGF。采用此方法降低了成本，并可应用于工业化生产。

主权项

1.一种通过二硫键异构酶PDI催化复性制备重组人神经生长因子rhNGF的方法，包括步骤①通过工程菌大肠杆菌表达rhNGF，②进行菌体破碎，③通过离心分离包含体，④利用变性体系变性溶解，⑤PDI催化复性，⑥脱盐以及⑦阳离子交换层析，其特征在于：步骤④的变性体系含有1-10M尿素，5-50mM Tris，1-5mM EDTA，且pH7-10；步骤⑤中rhNGF与PDI的摩尔比为100∶1-10∶1；步骤⑦的交换层析采用CM-Sepharose阳离子交换柱，洗脱条件为O-1M NaCl，pH4-8。