| 主权项 |
1.一哺乳动物细胞基因表现载体系统,其含多数之 质体并含: a.游离基因维持系统,其含oriP成分及EBNA1表现基因, b.强力启动子/强化子, c.含TAT及TAR二成分之蛋白质转活化系统,及 d.编码异质蛋白质之DNA。 2.根据申请专利范围第1项之系统,其中oriP成分及 EBNA1表现基因位于同一质体。 3.根据申请专利范围第1项之系统,其中oriP成分及 EBNA1表现基因位于分开之质体。 4.根据申请专利范围第1项之系统,其中oriP成分位 于质体,而其EBNA1蛋白位于宿主细胞中。 5.根据申请专利范围第1项之系统,其中强力启动子 /强化子为CMV。 6.根据申请专利范围第1项之系统,其中TAT及TAR成分 位于同一质体。 7.根据申请专利范围第1项之系统,其中TAT及TAR成分 位于分开之质体。 8.根据申请专利范围第1项之系统,其TAR成分位于质 体,而TAT成分位于表现细胞中。 9.根据申请专利范围第1项之系统,其中蛋白质转活 化系统含BMLF1蛋白质。 10.根据申请专利范围第9项之系统,其中BMLF1基因位 于同一质体。 11.根据申请专利范围第9项之系统,其中BMLF1基因位 于分开之质体。 12.根据申请专利范围第9项之系统,其BMLF1蛋白质于 细胞中表现。 13.根据申请专利范围第1项之表现载体系统,其中 异质蛋白质选自由IL-2SA及IL-4R组成之组。 14.根据申请专利范围第1项之系统,其中哺乳动物 细胞株来自灵长动物。 15.一种哺乳动物细胞株,其已含根据申请专利范围 第1项之哺乳动物基因表现载体。 16.根据申请专利范围第15项之哺乳动物细胞株,其 中细胞株为HKB11。 17.根据申请专利范围第15项之哺乳动物细胞株,其 中细胞株为293EBNA。 18.根据申请专利范围第15项之哺乳动物细胞株,其 中细胞株为一293细胞株。 19.一种表现异质蛋白质之方法,其使用根据申请专 利范围第15项之细胞株。 图式简单说明: 图1-1及1-2显示表现载体最适化之转染研究所用之 介白素-2突变蛋白(称为IL-2SA)之表现载体的实体图 谱;其包括组合之oriP及TAT/TAR成分。 图2显示BMLF转活化效应之转染研究所用之表现载 体之实体图谱。 图3为一显示用以监别及比较oriP效果,TAT/TAR转活化 效果及TAT/TAR转活化加上oriP效果之过渡性转染分 析中,IL-2SA分泌之强化的图。请注意线性化pSS179被 假设为IL-2SA表现程度之基线,因于限制线性化后 oriP之功能应会被消除;线性化pSS185也类似于此。 图4显示于一延长的培养期间,BMLF1对CHO细胞分泌IL- 2SA之转活化效应。于3dpt细胞以胰蛋白处理,以 一相同数目之细胞接种于含有补充5%FBS之新鲜培 养基的井孔上。经pSS179转染之CHO细胞分泌IL-2SA之 程序于4至7dpt维持相似于3dpt者。然而经pSS 212,213 及214转染之CHO细胞表现IL-2SA之程度于4dpt之后则未 显示任何于3dpt所呈现之BMLF1转染活性之强化效应 。 图5显示BMLF1对由HKB11细胞,于延长培养期间在药物 选择下,分泌IL-2SA之转活化效应。于3dpt由转染pSS 212,213及214之HKB11细胞可见之BMLF 1转活效应,于加入 Hyg B后已被消除,而TAT/TAR效应则于药物选择下被保 留,如图6所示。 图6显示于潮霉素B(hygromycin B)选择下,TAT/TAR对由HKB 11细胞分泌IL-2SA之转活效应。经转染细胞如上文 所述被保留。 图7显示高产量表现之共转染研究所用之表现载体 之实体图谱。 |
