偃麦草钠离子反向转运蛋白基因及其克隆方法与应用

摘要

本发明涉及偃麦草中Na⁺反向转运蛋白ENHX1基因的克隆、重组及耐盐性功能分析，属于分子生物学和生物技术领域。从偃麦草根中提取总RNA，然后将2微克总RNA反转录成cDNA。根据其它植物中的Na⁺反向转运蛋白中保守的氨基酸序列，设计一对兼并引物，进行常规聚合酶链式反应(PCR)，PCR产物连接到pGEM-T载体上，转化DH5α细胞，进行序列测定。然后进行3′和5′末端快速扩增获得全长的cDNA。进一步构建正义表达载体，转化拟南芥。转基因拟南芥具较高的耐盐性。因此，该基因转化小麦、水稻、玉米等作物，将会提高这些植物的耐盐性，将使得这些植物可以在盐碱地上种植，具有非常重要的经济效益和社会效益。

主权项

1.一种克隆的偃麦草钠离子反向转运蛋白基因ENHX1，其特征在于它具有下述所示的序列：1 ATCCGCCGAG GTGGCGACCG GCATGGGGCT CGATTTGGGA GCCATCGCTC TCAAGTACAC-6061 GGGGCTGGCG GTGTCGGACC ACGGCTCCAT CGTCGCCATC AACATCTTCA TCGCGCTGCT-120121 CTGCGGCTGC ATTGTCTTCG GCCACCTGCT CGAGGGGAAC CGCTGGGTCA ATGAGTCCAC-180181 CACCGCGCTT GTCCTGGGGC TCATCACCGG TGGTGTGATT CTGATCTGCT CCAAAGGGGT-240241 GAATTCGCGC ATCCTTATCT TCAGCGAGGA TATTTTCTTC ATCTACTTGC TCCCGCCCAT-300301 CATTTTTAAC GCCGGGTTTC AAGTAAAGAA AAAGCAATTC TTCCGCAACT TTGCGACAAT-360361 TATTTTATTT GGTGCTGCTG GAACATTGAT ATCCTTTGTA ATAATCACGT TCGGTGCTAT-420421 GGGATTGTTC AGCAAACTTG GTGTTGGTCC ACTCGAGCTT GGGGACTATC TTGCAATTGG-480481 GGCTATCTTC TCAGCAACAG ATTCTGTTTG CACCTTACGG GTGCTTAACC AGGATGAAGC-540541 ACCCCTACTC TATAGTCTAG TTTTTGGTGA AGGTGTTGTT AATGATGCTA CATCAGTTGT-600601 GCTCTTCAAT GCAATTCAAA ACATTGATAT TAATCATTTT GATGTCTTTG TTCTACTACA-660661 ATTCATTGGA AAATTCCTCT ACCTATTCTT CACCAGCACC GTTCTTGGAG TAGCTGCTGG-720721 GTTGCTTAGT GCATACATTA TTAAGAAACT TTGTTCTGCA AGACACTCAA CTGACAGAGA-780781 AGTTGCTATC ATGATACTCA TGGCATACCT TTCGTATATG CTGTCAATGT TGCTGGATCT-840841 GAGTGGCATT CTAACTGTGT TCTTCTGTGG AATAGTAATG TCACATTACA CTTGGCATAA-900901 TGTCACAGAA AGCTCAAGGG TTACTACCAA GCATACTTTT GCAACTTTAT CACTTATTGC-960961 TGAGATTTTT CTTTTTCTCT ATGTCGGGAT GGATGCATTG GACATTGATA AATGGAAATT-10201021 AGCTAGTAGC AGTCCTAAGA AACCAATTGC TTTAAGCGCT GTTATATTGG GTTTGGTTAT-10801081 GGTTGGAAGA GCAGCATTCG TATTCCCTTT ATCTTTTCTA TCGAACTTAA GTAAAAAGGA-11401141 GTCACACCCA AAGATTTCCT TCAACCAACA GGTTATCATC TGGTGGGCAG GTCTCATGAG-12001201 AGGAGCAGTT TCAATTGCAC TTGCTTATAA CAAGTTTACA ACATCTGGTC ATACTGCCGT-12601261 GCGAGTTAAT GCTGTCATGA TCACGAGCAC AATCATTGTT GTTCTGTTCA GCACAATGGT-13201321 TTTCGGCTTG CTGACTAAGC CTCTGATTAA TCTCCTCATC CCACCAAGAC CTGGCACTGC-13801381 AGCTGATATC TCGAGCCAGT CATTCCTAGA CCCACTTACG GCGAGCTTGT TGGGATCGGA-14401441 CTTCGATGTA GGCCAGCTCA CCCCTCAAAC AAACCTTCAG TATCTTCTCA CCATGCCAAC-15001501 TCGCTCGGTT CATCGTGTAT GGCGCAAGTT CGATGATAAG TTCATGCGCC CAATGTTTGG-15601561 GGGAAGAGGC TTCGTCCCAT TTGTGCCTGG TTCACCCATA GAGAGGAGCG TCCATGGGCC-16201621 TGGCTTGTTG GGCACTGTGA CGGAGGCAGA AGACCGTAGT TAAGTTGAAG CCCAGAAGGT-16801681 GCAAGTGTAT TTCTGTAAAT GCTCAGATAT CACTCAGTTT TGCTCTTGGG ATTCTTTCGG-17401741 TGTATTATCG CTATTTGTTG GTGTATATTG TGCAGATAGT TTCTACAGGA CCATGTACGC-18001801 TGTGTAGAGT TTTGGGAGCC ATTCAAGATG TACAATTAAT CTGTAAATTA ATTTCGTTCT-18601861 TGTTCAGACA GAACAATCAG ATGCTGGATA TTAGCATTCA TGTATAAAAG GAACTCAGGT-19201921 GGATAACTAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAA-1955。