工程菌LZ－17的构建和应用

摘要

本发明涉及工程菌LZ-17的构建和应用，属生物工程或基因工程技术领域。用分子克隆技术，将青海弧菌的发光基因导入鼠伤寒沙门氏菌TA97，构建成工程菌LZ-17。该工程菌能产生细菌荧光酶，加入葵醛后能发出波长为440～640nm的可见光；具备鼠伤寒沙门氏菌TA97所具有的与Ames试验有关的性状。该工程菌作为受试生物应用在Ames试验中，，可采用发光检测确定回变细菌的数量。发光Ames试验具有发光检测可自动化操作，省时、省力和细菌培养时间短等优点。该工程菌特别适于用来检测被检样品的致突变性。

主权项

1.一种构建工程菌LZ-17的方法，其特征在于，操作步骤：第一步 构建含有青海弧菌发光基因的质粒pDC67培养青海弧菌，提取该菌的DNA，然后用鸟枪法获取发光基因，利用质粒pBR322，使发光基因与该质粒重组，构建成带有青海弧菌发光基因的重组质粒pDC67；第二步 构建重组质粒pACYCL184培养重组质粒pDC67，用Hind III和BamHI双酶切，与经同样培养的质粒pACYC184一起，用Hind III酶切，T4连接酶连接，用CaCl2转化法转入受体菌HB101中，培养后长出菌落，从中挑取发光菌落，提取该菌落中的重组质粒pACYCL184；第三步 构建成工程菌LZ-17的菌株将TA97细胞培养至感受态，加入质粒pACYCL184，用电击穿孔法使质粒pACYCL184进入TA97细胞，37℃培养48h后，长出菌落，从中挑取发光菌落，即构建成的工程菌LZ-17的菌株，得工程菌LZ-17。