主权项 |
1、一种单个微生物细胞进行观察的方法,它包括下列步骤:A、制备琼脂糖凝胶:先称取0.02~0.2克的琼脂糖粉,然后溶解于10毫升的双蒸水中,经过115℃30分钟或121℃20分钟灭菌,琼脂糖凝胶冷却至38~42℃,保温待用;B、微生物细胞悬液的制备:首先接种单菌落至培养基中,活化微生物细胞至稳定期,然后转接细胞至培养基中继续培养,当细胞生长至对数期或稳定期时取出含有细胞的培养液待用;C、微生物细胞悬液和琼脂糖凝胶混合液的制备:琼脂糖凝胶和微生物细胞悬液分别按照步骤A和B进行,琼脂糖凝胶和微生物细胞悬液按体积比进行混合,体积比范围为10比1到1比10,吸取细胞悬液放置于三角烧瓶中,然后向其中加入等体积的琼脂糖凝胶,震摇,得到一种混合液;D、将混合液倒于载物片上:将玻璃条粘附在另一块载玻片上,在工形凹槽中央刻出蚀刻线,然后将步骤C制备得到的混合液用移液器吸取2~3毫升点加在载物片的工形槽上,然后压上盖玻片,混合液将填满工形槽,之后静置于超净工作台内,冷却至25~30℃;E、将上述混合液和载物片固定于显微镜上,进行操作和观察:在上述混合液冷却至25~30℃后,将载物片移至显微镜的载物台上,并用透明胶固定;F、观察及更换细胞溶液:使用显微镜、照相机和电脑组成的系统对固定微生物细胞进行单个的观察和拍照,在载物片工形槽的一边用滤纸吸取原溶液,在另一边补充替换溶液。 |