| 主权项 |
1.一种纯化的FIV-141病毒,其中该病毒具有基因体核 酸序列,其系相当于SEQ ID NO:1。 2.一种宿主细胞,其系以申请专利范围第1项的病毒 予以感染。 3.一种FIV-141的子代病毒,其系由申请专利范围第2 项之宿主细胞制造。 4.一种引发对抗FIV-141之抗体的制造之方法,包括以 申请专利范围第1项的病毒感染动物。 5.如申请专利范围第4项之方法,其中该病毒于接种 前先去活性。 6.一种引发对抗FIV-141之抗体的制造之方法,其包括 以申请专利范围第2项的宿主细胞感染动物。 7.如申请专利范围第6项之方法,其中该细胞于感染 前先固定化。 8.如申请专利范围第4-7项中任一项之方法,其进一 步包括从该动物分离该抗体。 9.一种全病毒疫苗,其包括申请专利范围第1项之FIV -141病毒,其中该病毒已经去活性。 10.一种固定化细胞疫苗,其包括以申请专利范围第 1项之病毒感染的宿主细胞,其中该宿主细胞已经 固定化。 11.一种纯化的核酸分子,其具有相当于SEQ ID NO:1之 序列。 12.如申请专利范围第11项之核酸分子,其中该核酸 是DNA。 13.一种宿主细胞,其系以申请专利范围第11项之核 酸予以转染。 14.一种FIV的子代病毒,其系由申请专利范围第13项 之宿主细胞制造。 15.一种在动物体内引发对抗FIV-141之抗体的制造之 方法,其包括注射申请专利范围第11项的核酸分子 至该动物。 16.一种在动物体内引发抗体的制造之方法,其包括 以申请专利范围第13项之宿主胞感染该动物。 17.如申请专利范围第16项之方法,其中该宿主细胞 于感染前先固定化。 18.如申请专利范围第15-17项中任一项之方法,其进 一步包括自该动物分离该抗体。 19.一种固定化细胞疫苗,其包括以申请专利范围第 11项的核酸转染宿主细胞,其中该宿主细胞已经固 定化。 20.一种减毒FIV-141病毒,其于进入宿主细胞内复制 但与野生型病毒比较时对猫T淋巴细胞之感染力显 着降低,其中该减毒病毒的制造是经由删除突变FIV -141基因体的基因,该基因选自Vin,MA,ORF(2),ENV,CA,NC,SU ,TMf,CT,IN,DU,V3/4,V7/8或RRE。 21.如申请专利范围第20项之减毒FIV-141病毒,其中该 基因选自Vif,MA,ORF(2)或ENV。 22.一种宿主细胞,其系以申请专利范围第20项之减 毒病毒予以转染。 23.一种FIV-141减毒病毒,其系由申请专利范围第22项 之宿主细胞制造。 24.一种引发对抗FIV-141之抗体的制造之方法,其包 括以申请专利范围第20项之减毒FIV-141病毒感染动 物。 25.如申请专利范围第24项之方法,其中该减毒FIV-141 病毒于感染前先去活性。 26.一种引发对抗FIV-141之抗体的制造之方法,其包 括以申请专利范围第22项之宿主细胞感染动物。 27.如申请专利范围第26项之方法,其中该宿主细胞 于感染前先固定化。 28.如申请专利范围第24-27项中之任一项之方法,其 进一步包括自该动物纯化该抗体。 29.一种减毒全病毒疫苗,其包括申请专利范围第20 或21项之病毒。 30.一种减毒的宿主细胞疫苗,其包括申请专利范围 第22项之宿主细胞。 31.一种减毒的宿主细胞疫苗,其包括受申请专利范 围第21项之病毒感染之宿主细胞。 32.一种纯化的FIV-141核酸分子,其具有相当于SEQ ID NO:1的序列,但其中该核酸分子系经删除突变且系 于一基因中,该基因选自Vif,MA,CA,NC,SU,TMf,ORF(2),CT,ENV ,Vifn,Vifc,IN,DU,V3/4,V7/8或RRE,且其中该删除突变之分 子导入宿主细胞后所制造的病毒虽可复制但相对 于野生型FIV-141在PBMCs中之感染力系显着降低。 33.如申请专利范围第32项之核酸分子,其中该基因 选自MA,Vif,ORF(2)或ENV。 34.如申请专利范围第32或33项之核分子,其中该 核酸是DNA。 35.一种宿主细胞,其系以申请专利范围第32项之核 酸分子予以转染。 36.一种FIV的子代病毒,其系由申请专利范围第35项 之宿主细胞制造。 37.一种在动物体内引发对抗FIV-141之抗体的制造之 方法,其包括注射申请专利范围第32项的核酸分子 至该动物体内。 38.一种在动物体内引发对抗FIV-141之抗体的制造之 方法,其包括以申请专利范围第35项之宿主细胞注 射该动物。 39.如申请专利范围第38项之方法,其中该宿主细胞 于感染前先固定化。 40.如申请专利范围第37-39项中之任一项之方法,其 进一步包括自该动物分离该抗体。 41.一种疫苗,其包括申请专利范围第32项的核酸分 子,其浓度当给与猫时系足以引发免疫作用。 42.如申请专利范围第41项的疫苗,其中该核酸是DNA 。 43.一种疫苗,其包括以申请专利范围第32项的核酸 分子转染宿主细胞。 44.如申请专利范围第43项的疫苗,其中该宿主细胞 已经固定化。 45.一种制造减毒FIV-141病毒之方法,该病毒虽可进 入宿主细胞内复制但其相对于野生型部分具有显 着降低之感染力,该方法包括藉由删除突变1或多 个选自下列之基因:MA,CA,NC,DU,ENV,SU,TMf,CT,V3/4,V7/8,Vif ,Vifn,Vifc,IN,RRE或ORF(2)。 46.如申请专利范围第45项之方法,其中该基因选自 MA,ORF(2)或ENV。 47.一种减毒FIV-141病毒,其系经由申请专利范围第45 或46项之方法制造。 48.一种宿主细胞,以如申请专利范围第47项之减毒 病毒予以感染。 49.一种引发对抗FIV-141病毒之抗体的制造之方法, 其包括以申请专利范围第47项之减毒病毒感染哺 乳动动。 50.一种引发对抗FIV-141病毒之抗体的制造之方法, 其包括以申请专利范围第48项之宿主细胞感染哺 乳动物。 51.如申请专利范围第50项之方法,其进一步包括自 该哺乳动物纯化该抗体。 52.一种减毒全病毒疫苗,其包括申请专利范围第45 或46项之病毒。 53.一种减毒的宿主细胞疫苗,其包括申请专利范围 第48项之宿主细胞。 54.一种制造核酸之方法,该核酸系适用于对抗FIV感 染之疫苗,该方法包括a)反转录该FIV基因体的RNA,b) 选殖步骤a)所反转录的RNA,c)藉由删除突变步骤b)所 选殖核酸中的基因,其中该基因选自MA,CA,NC,SU,TMf, ORF(2),CT,ENV,V3/4,V7/8,Vif,Vifn,Vifc,IN,DU或RRE,及d)选殖步 骤c)中经删除突变之核酸。 55.如申请专利范围第54项之方法,其中该删除突变 之分子导入宿主细胞后所制造的减毒病毒虽可复 制,但相对于未突变的野生型核酸之FIV具有显着降 低之感染力。 56.如申请专利范围第55项之方法,其中该减毒病毒 虽可复制但相对于未突变的野生型核酸之FIV对猫T 淋巴细胞具有显着降低之感染力。 57.如申请专利范围第55或56项之方法,其中该基因 选自MA,ORF(2)或ENV。 58.一种宿主细胞,其系以申请专利范围第57项之核 酸分子予以转染。 59.一种子代FIV,其系由申请专利范围第58项之宿主 细胞制造。 60.一种引发对抗至少一种FIV菌株之抗体的制造之 方法,其包括注射申请专利范围第54项所述之核酸 分子至该动物体内。 61.一种疫苗,其包括申请专利范围第55项所述之核 酸分子,当给与哺乳动物时其浓度系足以引发免疫 作用。 62.一种疫苗,其包括申请专利范围第56项所述之核 酸分子,当给与猫时其浓度系足以引发免疫作用。 63.一种疫苗,其包括申请专利范围第58项至宿主细 胞。 64.一种ATCC编号VR-619之猫免疫缺乏病毒及由彼制备 之子代病毒。 65.一种质体,其命名为pFIV-141-B1且CCRC编号为940216。 图式简单说明: 图1:从被转染细胞中制造FIV。以含有全长FIV-141基 因体的质体转染柯南戴尔(Crandell)猫肾(CRFK)细胞。 在转染后的最初24小时,收集细胞悬浮液并利用酵 毒免疫分析法分析FIV p26蛋白衣蛋白质的存在。 图2:经由共-培养感染FeP2 T淋巴球细胞。将CRFK细胞 生长在六凹孔平板内并以含生长FIV-141基因体之质 体DNA转染之。转染后48小时,每个凹孔导入2106 FeP2 细胞。共培养后的开始72小时将FeP2细胞分离出,并 以ELISA测试其悬浮液FIV p26蛋白衣蛋白质的出现。 图3:经由吸附作用感染FeP2细胞。将2106 FeP2细胞悬 浮于200微升之含有FIV-141病毒的条件培养液中,此 溶液是衍生自以全长之具感染性FIV-141选殖株所转 染的CRFK细胞。感染后的开始4天,利用p26 ELISA分析 测试FeP2细胞悬浮液中FIV-141病毒的出现。 图4:经由删除性选殖株表现FIV-141的病毒蛋白质。 制造各种删除FIV基因或调节区域的突变选殖株,并 转染到CRFK细胞内。48小时后,以ELISA分析细胞悬液 中FIV p26蛋白衣蛋白质的出现。显示出每一删除性 选殖株及野生型FIV-141分子选殖株的结果。 图5-10:以FIV-141突变体感染FeP2 T淋巴球细胞。将CRFK 细胞生长在六凹孔平板内,并以三个不同FIV-141删 除选殖株(TMF del、ENV del或NC del)之一感染。48小时 后,每一凹孔加入FeP2细胞且维持额外72小时的共- 培养。然后从CRFK细胞中分离出FeP2细胞,并使用 ELISA分析法分析p26抗原的存在。每3-4天就重复侦 测p26浓度并将结果显示在图5中。此实验重复使用 :Vifn del;Vifc del及Vif del(图6);MA del及CA del(图7);V3/4 del、V7/8 del及CT del(图8);ORF(2)del(图9);和DU del,SU del, IN del和RRE del(图10)。 |
