球孢白僵菌无纺布菌条生产工艺方法

摘要

本发明涉及一种真菌杀虫剂新剂型的生产方法，确切地说是球孢白僵菌无纺布菌条生产工艺方法。该方法包括五道生产工序，即菌种的取得、一级斜面菌种培养、液体种子培养、液体发酵罐生产和菌条的接种培养。本发明生产的杀虫剂，对害虫的防治效果持久，对天牛类蛀干害虫杀虫效果明显且稳定，受天气影响相对较小，工艺稳定，投资少，占地小，生产无三废问题。

主权项

1、球孢白僵菌无纺布菌条生产工艺方法，其特征在于：A、菌种：球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin]分离自天牛感病虫尸；B、一级斜面菌种培养：将分离纯化的菌种接种于PPDA培养基斜面，放入25℃培养箱，培养9～14天，待菌丝长满斜面并产孢时，转入摇瓶培养；C、液体种子培养：在500ml三角瓶中，装入200ml的液体种子培养基，1.5pa/kg高压灭菌30分钟，待冷却至40℃左右，接入斜面菌种，接种量为500ml三角瓶接2支培养好的一级斜面菌种，试管规格150mm×15mm，接种后置于恒温振荡培养箱，24-26℃，180转/分，培养3天～5天即可；D、液体发酵生产：采用三级发酵(1)、一级种子罐生产取70L气升式发酵罐，装入50L液体培养基，温度大于95℃，并加入消泡剂聚氧丙烯氧化乙烯甘油醚15ml，在14.7×104Pa压力下，保压25～40分钟，消毒冷却后将4瓶上述培养好的500ml摇瓶种子接入培养，24-26℃，通气量1∶0.5，保压4.903～7.0845×104Pa，经60～72小时通气培养，达到对数生长期后，接入二级种子罐；(2)、二级种子罐生产取700L气升式发酵罐，装入450L液体培养基，温度大于95℃，并加入消泡剂聚氧丙烯氧化乙烯甘油醚150ml，在14.7×104Pa压力下，保压25～40min，消毒冷却后将一级种子罐种子50L全部接入二级种子罐培养，温度24～26℃，通气量1∶0.5，保压4.903～7.0845×104Pa，经60～72小时通气培养，达到对数生长期后，接入三级种子罐；(3)、三级种子罐生产取7T气升式发酵罐，装入4.5T液体培养基液体，pH6.0～7.0，加入的热水温度大于95℃，并加入消泡剂聚氧丙烯氧化乙烯甘油醚1500ml，通入蒸汽加热到121℃，保压30分钟，冷却至24～26℃，将二级种子罐培养好的液体种子500L全部接入，通气培养，通气量1∶0.4～0.5V/V·min，搅拌转速190r/m，罐压4.903～7.0845×104Pa，培养时间72～96小时；当发酵液中出现大量菌丝及液生孢子时，残糖在1％以下，发酵液较粘稠，另外镜检菌丝变细、菌丝体中无明显的液泡，发酵液中无明显断裂的菌丝，可放罐；E、将无纺布条在1.5Pa/Kg高压灭菌30分钟，冷却后按700条无纺布条接入100L发酵液的比例接入已培养好的发酵液，在20～28℃，RH95％的培养室架上平铺培养5天，待菌条上长满菌丝后，移入温度在20～28℃，RH90％的培养室继续培养3～5天，菌条上长满大量孢子，风干即可。