Verfahren zur Herstellung von Phospholipase A2

摘要

Der Erfindung liegt das Problem zu Grunde, eine Phospholipase A¶2¶ zu gewinnen, die nicht aus einem tierischen Organismus isoliert wird, in industriellem Maßstab herstellbar ist und für die biokatalytische Spaltung von Phospholipiden geeignet ist. DOLLAR A Analog der Nukleotidsequenz des Gens der natürlich vorkommenden PLA¶2¶ der Honigbiene werden Oligonukleotide mit jeweils 50-60 bp synthetisch hergestellt, die alternierend die beiden Stränge der DNA darstellen und an ihren Enden jeweils um bis zu 25 Nukleotide komplementär überlappen. Das dem N-Terminus des Proteins entsprechende DNA-Ende wird modifiziert und das Codon für das N-terminale Isoleucin durch das Codon für Alanin oder Valin ersetzt. Mittels PCR-Technik wird aus den synthetisch hergestellten Oligonukleotiden die vollständige Gensequenz erhalten. Das Enzym wird mittels Proteinexpression in der Zelle erhalten, welches anschließend isoliert und renaturiert wird. DOLLAR A Phospholipase A¶2¶ wird zur biokatalytischen Spaltung von natürlich vorkommenden Phospholipiden eingesetzt. Die spezifischen Spaltprodukte (Lysophospholipide) gelangen als Emulgatoren in der pharmazeutischen, kosmetischen und Diätmedizin zum Einsatz.