CONSTRUCCION DIRIGIDA DE ORIENTACION DE PLASMIDOS.

摘要

Un método para la construcción dirigida de orientación de una construcción comprende al menos dos segmentos de ácidos nucleicos de interés, comprendiendo dicho método las etapas de: a. proporcionar productos que tienen extremos ramos fosforilados obtenidos de dichos segmentos de ácidos nucleicos de interés; b. realizar reacciones de ligamiento por separado, donde en cada reacción los productos de extremos romos fosforilados de dos segmentos diferentes obtenidos en la etapa (a) se ligan para crear una secuencia ligada combinada; c. realizar una reacción de amplificación por PCR usando dicha secuencia ligada combinada obtenida en la etapa (b) como molde y cebadores de enriquecimiento específico dirigiendo dicha amplificación de PCR hacia la orientación deseada, donde cada secuencia ligada combinada se amplifica en una reacción por separado creando un producto combinado que tiene extremos romos fosforilados; d. aislar y purificar dicho producto combinado que tiene la orientación deseada enriquecida obtenida en la etapa (c); e. opcionalmente, la repetición cíclica de las etapas (b) a (d) para una cantidad deseada de veces, para crear un producto combinado aislado que tiene la orientación deseada; y f. realizar el autoligamiento de dicho producto combinado purificado aislado obtenido en la etapa (e), creando una construcción de ADN de doble cadena circular que contiene los segmentos deseados alineados apropiadamente y unidos de manera operativa.